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簡介1實驗1全細胞裂解物的雙向凝膠電泳和MALDI 質譜分析

操作程序1.1酵母細胞裂解液的制備

操作程序1.2IPG膠條的再水化和等電聚焦

操作程序1.3等電聚焦膠條的平衡

操作程序1.4第二向--SDS.PAGE

操作程序1.5用SYPRO Ruby進行全蛋白染色

操作程序1.6用Pro.Q Diamond進行磷酸化蛋白染色

操作程序1.7用Pro.Q Emerald進行糖蛋白染色

操作程序1.8用考馬斯亮藍進行全蛋白染色

操作程序1.9用質譜兼容的銀染進行全蛋白染色

操作程序1.102D膠的圖像分析和蛋白質回收

操作程序1.11膠內酶切

操作程序1.12MALDI點靶29實驗2用于質譜分析的蛋白質復合物的純化

操作程序2.1培養并收集TAP標記的酵母細胞

操作程序2.2為純化TAP標記蛋白質復合物制備酵母細胞抽提物

操作程序2.3及時步親和富集--利用IgG親和色譜從酵母抽提物中捕獲TAP標記的蛋白質復合物

操作程序2.4第二步親和富集--TAP.標記的蛋白質復合物的鈣調蛋白親和色譜

操作程序2.5與磁珠的結合

操作程序2.6蛋白質復合物的親和純化

實驗3用MALDI TOF/TOF串聯質譜進行肽的定性和定量分析

操作程序3.1實驗描述

實驗4蛋白質復合物分析--高靈敏液相色譜與串聯質譜聯用

操作程序4.1HPLC柱毛細管的制作

操作程序4.2填裝微毛細管FSC柱

操作程序4.3微毛細管RP.HPLC與ESI.質譜聯用

實驗5用IMAC和質譜分析磷酸化肽

操作程序5.1制備IMAC樣品

操作程序5.2制備IMAC柱和反相捕獲柱(前柱)

操作程序5.3制備IMAC柱

操作程序5.4樣品處理

實驗6全細胞裂解物的多維蛋白質鑒定技術分析

操作程序6.1使用多維蛋白質鑒定技術分析全細胞裂解物

實驗7全細胞提取物的定量質譜檢測技術(iTRAQ)

操作程序7.1從酵母細胞制備肽

操作程序7.2以iTRAQ試劑標記肽

操作程序7.3應用反向色譜柱提純肽

操作程序7.4多肽等電聚焦95實驗8串聯質譜數據的分析及確認

操作程序8.1使用Global Proteome Machine系統分析LC.MS/MS數據

操作程序8.2使用ProteinPilot軟件進行肽段和蛋白質鑒定

操作程序8.3對數據庫檢索程序鑒定為能夠匹配肽段序列的MS/MS譜圖

進行評價118實驗9開放閱讀框的高通量克隆--構建大量表達結構

操作程序9.1利用Gateway LR反應構造表達結構

操作程序9.2用Gateway LR反應產物化學轉化感受態細菌

實驗10蛋白質微陣列的構建--核酸可編程性蛋白質陣列

操作程序10.1用氨基甲硅烷包被載玻片

操作程序10.2在96孔板中制備細菌的培養物

操作程序10.3從96孔板中分離質粒DNA

操作程序10.4DNA的生物素化、沉淀及樣品布陣

操作程序10.5NAPPA載玻片上蛋白質的表達

操作程序10.6檢測NAPPA載玻片上的蛋白質

操作程序10.7在NAPPA芯片上測定DNA151

實驗11使用核酸可編程性蛋白質陣列鑒定蛋白質.蛋白質相互作用

操作程序11.1NAPPA芯片與查詢蛋白共表達

操作程序11.2在NAPPA芯片上檢測查詢蛋白

附錄1鈉升電噴霧電離離子源和串聯質譜裝置和示范

附錄2溶液內蛋白質的消化

附錄3凝膠內胰酶消化已分離蛋白

附錄4三氯乙酸蛋白質沉淀法

附錄5氨基酸的單同位素和亞銨離子分子量

附錄6氨基酸二肽分子量

附錄7LTQ離子阱的使用方法

附錄8肽段混合物離線去鹽

附錄9感受態細胞的制備

附錄10DNA的定量

附錄11注意事項

索引