引論：我們?yōu)槟砹?3篇醫(yī)學(xué)技術(shù)論文范文，供您借鑒以豐富您的創(chuàng)作。它們是您寫(xiě)作時(shí)的寶貴資源，期望它們能夠激發(fā)您的創(chuàng)作靈感，讓您的文章更具深度。
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2SELEX技術(shù)的發(fā)展
目前SELEX技術(shù)出現(xiàn)了一些新的篩選方法，越來(lái)越多的與各種標(biāo)靶相對(duì)應(yīng)的適配體被篩選出來(lái)。如毛細(xì)管電泳法、硝酸纖維素膜過(guò)濾法、磁珠分離法、親和色譜法、Non-SELEX技術(shù)、無(wú)引物PCR-SELEX技術(shù)、微流體SELEX技術(shù)、生物芯片SELEX技術(shù)、原子力顯微鏡等各種新的模式也被應(yīng)用到適配體的篩選中。同時(shí)還出現(xiàn)了SELEX技術(shù)與定量PCR，SEL-EX技術(shù)與流式細(xì)胞儀、SELEX技術(shù)與ELISA的聯(lián)合應(yīng)用，更是極大的提升了篩選的效率和準(zhǔn)確性。
2．1消減SELEX技術(shù)消減SELEX技術(shù)是一種經(jīng)過(guò)改良的SELEX技術(shù)。以完整細(xì)胞為靶標(biāo)的消減SELEX技術(shù)，是在篩選過(guò)程中以完整的細(xì)胞作為靶標(biāo)，并消減掉能與已知或未知的共有靶標(biāo)結(jié)合的配體，經(jīng)過(guò)消減后的次級(jí)隨機(jī)文庫(kù)再投入到特異靶標(biāo)的篩選中。它的意義在于可以實(shí)現(xiàn)從兩組高度同源的完整細(xì)胞中，篩選出針對(duì)其中一種細(xì)胞的特異性適配體。這項(xiàng)技術(shù)可應(yīng)用于發(fā)現(xiàn)新的腫瘤細(xì)胞識(shí)別結(jié)構(gòu)，還可進(jìn)一步作為“生物導(dǎo)彈”，獨(dú)立完成靶向治療或攜帶藥物，未來(lái)將會(huì)在腫瘤的治療中發(fā)揮巨大的功效。
2．2自動(dòng)化SELEX技術(shù)傳統(tǒng)的SELEX技術(shù)過(guò)程需要完成一套重復(fù)繁瑣的操作，使得篩選相對(duì)耗時(shí)耗力。自動(dòng)化SELEX技術(shù)的建立可以簡(jiǎn)化篩選過(guò)程，節(jié)約時(shí)間和物品的消耗，實(shí)現(xiàn)高通量和限定范圍，達(dá)到同時(shí)篩選多個(gè)靶分子的效果。自動(dòng)化SELEX技術(shù)離不開(kāi)現(xiàn)代分離儀器的配合，后者的發(fā)展推動(dòng)了前者的進(jìn)步。2001年Cox等使用Biomek2000自動(dòng)化工作站成功篩選到了溶菌酶的特異性適配體，通過(guò)這種自動(dòng)化篩選平臺(tái)，不到2d就完成了12輪的篩選。
2．3導(dǎo)向SELEX技術(shù)適配體的特異性是整個(gè)SELEX技術(shù)的核心所在，為了提高適配體的特異性和穩(wěn)定性，可將已知的能與靶標(biāo)非特異結(jié)合的分子摻入到文庫(kù)中或預(yù)先與靶標(biāo)進(jìn)行混合后再篩選，這樣可獲得只與靶標(biāo)特異結(jié)合的適配體。2002年Hamm等將此技術(shù)與抗個(gè)體基因型的方法聯(lián)合運(yùn)用，成功獲得了特定激酶抑制劑的特異性RNA適配體。Martell運(yùn)用特殊的導(dǎo)向SELEX技術(shù)，從隨機(jī)表達(dá)盒雜交文庫(kù)中篩選到了能與E2F蛋白具有高親和性的RNA適配體。
3SELEX技術(shù)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用
3．1SELEX技術(shù)在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用依據(jù)核酸適配體具有與靶物質(zhì)高特異性結(jié)合的能力，可以幫助我們尋找到疾病的發(fā)病機(jī)制。Roulet等提出把SELEX技術(shù)同基因表達(dá)串行分析手段聯(lián)合應(yīng)用，并通過(guò)自動(dòng)化的序列提取工藝，建立轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的定位模型。通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)錄因子適配體文庫(kù)中的某一序列進(jìn)行測(cè)序，可了解該蛋白結(jié)合位點(diǎn)的特異性，探尋一些以前在基因組中從未研究過(guò)的結(jié)合位點(diǎn)，掌握在不同的核苷酸位點(diǎn)上非獨(dú)立堿基出現(xiàn)的先后順序，為闡明其結(jié)合機(jī)制提供一些線索。Bian-chi等采取SELEX技術(shù)發(fā)現(xiàn)，TRF1二聚體在端粒上有兩個(gè)相同的識(shí)別半位點(diǎn)，它們的距離可以變化，且兩個(gè)半位點(diǎn)的順序方向沒(méi)有區(qū)別。這為探索端粒長(zhǎng)度的調(diào)節(jié)機(jī)制提供了新依據(jù)。
3．2SELEX技術(shù)在疾病診斷中的應(yīng)用腫瘤細(xì)胞及其標(biāo)志物的早期檢測(cè)對(duì)于腫瘤的診斷及預(yù)后極為重要，目前已經(jīng)篩選出多種腫瘤的特異性適配體，例如急性髓系白血病的適配體KH1C12、急性淋巴細(xì)胞白血病的適配體sgc8/sgc3/sgd3、惡性膠質(zhì)瘤的適配體GBI-10、Burrkitt淋巴瘤的適配體TD05、非小細(xì)胞肺癌的適配體S1/S11e/S15、小細(xì)胞肺癌的適配體HCA12/HCC03/HCH07/HCH01、乳腺癌的適配體KMF2-1a、結(jié)腸癌的適配體KDED2/KD-ED7/KDED9/KC2D3、小鼠肝癌的適配體TLS9a/TLS11a、卵巢癌的適配體DOV3/DOV4/DOV6。它們可以特異地識(shí)別腫瘤細(xì)胞，僅需少量腫瘤細(xì)胞即可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的鑒別和分型。將適配體與納米顆粒結(jié)合后通過(guò)比色檢測(cè)，觀察顏色的變化即可判斷有無(wú)靶標(biāo)細(xì)胞。這個(gè)實(shí)驗(yàn)非常敏感，樣本中的靶細(xì)胞數(shù)超過(guò)百個(gè)即可檢測(cè)出來(lái)，還不需要昂貴的檢測(cè)設(shè)備和待檢靶標(biāo)的標(biāo)記與修飾。因此，有可能成為常規(guī)篩查活體標(biāo)本中新生腫瘤細(xì)胞的一種新方案。與此同時(shí)腫瘤細(xì)胞的分子成像技術(shù)也已經(jīng)問(wèn)世，它能夠從細(xì)胞水平對(duì)生物過(guò)程進(jìn)行可視化描述及測(cè)量，不僅能定位病灶，觀察某些影響腫瘤細(xì)胞行為的生物過(guò)程，還能觀察腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的反應(yīng)。Kim等研究將前列腺特異性膜抗原(PSMA)的特異性適配體與金納米材料結(jié)合后，帶有PSMA的前列腺癌細(xì)胞便能夠被特異性地標(biāo)記出來(lái)，將其作為造影劑應(yīng)用在前列腺腫瘤的影像學(xué)診斷中，比傳統(tǒng)的造影劑顯像時(shí)間更持久，毒副作用更小，應(yīng)用價(jià)值更顯著。SELEX技術(shù)還在血液的生化檢查方面，顯示出一定的應(yīng)用前景。用其檢測(cè)血液中的某些靶分子，將比傳統(tǒng)方法更特異和高效。腦尿鈉肽(BNP)常被臨床上用來(lái)評(píng)價(jià)急性心力衰竭或急性呼吸窘迫癥患者的病情和預(yù)后。Lin等采用SELEX技術(shù)的原理，篩選到了能與BNP特異結(jié)合的適配體。在微流體試驗(yàn)?zāi)Ｊ较拢粺晒鈽?biāo)記的適配體可以快速測(cè)出血液中BNP的濃度，比放射免疫分析法或是免疫分析技術(shù)更精確、更經(jīng)濟(jì)。C反應(yīng)蛋白(CRP)是機(jī)體在應(yīng)激狀態(tài)下生成的一種非特異性的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，CRP與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死等心血管疾病具相關(guān)性。Bini等開(kāi)發(fā)出了一種帶有光化學(xué)性質(zhì)的CRP特異性適配體，當(dāng)血液中的CRP濃度超0．005mg/L時(shí)就能被檢測(cè)出來(lái)，敏感度非常高。這一成果為新型CRP診斷試劑的研制奠定了基礎(chǔ)。SELEX技術(shù)還被應(yīng)用在病原微生物的檢測(cè)，其能克服傳統(tǒng)檢測(cè)方法在特異性和敏感性上的缺陷，為新型檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)提供有力支持。例如結(jié)合分支桿菌的特異性適配體CSRI2．11檢測(cè)過(guò)程比傳統(tǒng)的培養(yǎng)鑒定法更省時(shí)更敏感;丙型肝炎病毒的適配體ZE2可結(jié)合酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)實(shí)現(xiàn)丙型肝炎的早期篩查，不受抗體檢測(cè)時(shí)窗口期的制約;瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶的適配體PL1在臨床實(shí)踐中，可以很好的區(qū)分患者是否感染了出間日瘧原蟲(chóng)或惡性瘧原蟲(chóng)。
3．3SELEX技術(shù)在疾病治療中的應(yīng)用SELEX技術(shù)在疾病治療中的功效越來(lái)越來(lái)受到人們的重視。適配體在體內(nèi)與靶分子結(jié)合，理論上可以對(duì)靶分子的生理功能和代謝過(guò)程產(chǎn)生影響，靶分子也會(huì)因此發(fā)生信號(hào)傳導(dǎo)的改變甚至喪失原本的功能，直接或間接阻斷疾病發(fā)生進(jìn)程。以此開(kāi)發(fā)的靶蛋白功能阻斷劑，日益顯示出其巨大的潛力。全球首個(gè)適配體藥物是2004年由美國(guó)食品和藥物管理局批準(zhǔn)上市的哌加他尼鈉，可用來(lái)治療老年性黃斑變性。SELEX技術(shù)在凝血系統(tǒng)疾病的治療上具有一定的意義，已找到了可用作抗凝血和抗血栓藥物的適配體REG-1，其結(jié)合的位點(diǎn)是凝血酶的肝素結(jié)合位點(diǎn)以及纖維蛋白原結(jié)合位點(diǎn)。在治療免疫系統(tǒng)疾病方面，也已獲得了具有藥物開(kāi)發(fā)潛力的特異性適配體，如可用來(lái)拮抗自身抗體已達(dá)到治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的適配體，還有能刺激T細(xì)胞釋放的4-1BB的適配體。對(duì)于腫瘤的治療，基于SELEX技術(shù)研制的適配體藥物更是走在前列，進(jìn)入到了臨床試驗(yàn)階段。如對(duì)實(shí)體瘤和復(fù)發(fā)性急性髓樣白血病有良好療效的AS1411，更出現(xiàn)了連接金納米棒的適配體，用作腫瘤靶向光熱治療。適配體藥物作為抗病毒藥，也展現(xiàn)出良好的前景，比如用來(lái)抑制狂犬病病毒的復(fù)制和干擾艾滋病病毒的體內(nèi)合成。除此以外，核酸適配體還可作為運(yùn)輸工具，特異性地把藥物運(yùn)送至靶標(biāo)細(xì)胞或組織達(dá)到定點(diǎn)清除的治療效果，研究比較成熟的有裝載著阿霉素，用來(lái)殺傷前列腺癌細(xì)胞的復(fù)合適配體藥物。
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1.3增設(shè)一些有特色的選修課以加強(qiáng)學(xué)生對(duì)當(dāng)前最新技術(shù)的了解和應(yīng)用。如針對(duì)檢驗(yàn)科的大型儀器設(shè)備，檢驗(yàn)人員只需了解儀器性能及常見(jiàn)故障排除。因此，可以將《檢驗(yàn)儀器維修》這門課程改為選修課或以專題講座形式開(kāi)出。也可將幾門臨床主干課程中的臨床檢驗(yàn)儀器集中為臨床檢驗(yàn)儀器學(xué)課程，避免重復(fù)講授。為加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制，開(kāi)設(shè)《臨床實(shí)驗(yàn)室管理》課程，可以將生化、免疫、細(xì)胞等質(zhì)量管理的內(nèi)容集中起來(lái)，不必在多門專業(yè)課中重復(fù)講授;而針對(duì)《臨床實(shí)驗(yàn)室管理》內(nèi)容比較抽象，可以組織學(xué)生在臨床實(shí)習(xí)期間邊實(shí)踐邊學(xué)習(xí)，其教學(xué)效果會(huì)更好。
2課程開(kāi)設(shè)順序
課程開(kāi)設(shè)順序總體要求是通識(shí)課程、專業(yè)基礎(chǔ)課程、臨床醫(yī)學(xué)課程、專業(yè)課程、選修課，這樣依照學(xué)科的發(fā)展、知識(shí)的關(guān)聯(lián)與銜接來(lái)設(shè)置。有平行課程時(shí)要平衡開(kāi)課實(shí)驗(yàn)室和教研室的學(xué)年工作量。實(shí)訓(xùn)課中的軍事訓(xùn)練建議在新生入學(xué)時(shí)安排，以規(guī)范學(xué)生的行為習(xí)慣，養(yǎng)成良好的時(shí)間觀念、組織紀(jì)律觀念、集體觀念和講求規(guī)范及雷厲風(fēng)行的工作作風(fēng)，促進(jìn)校風(fēng)校紀(jì)建設(shè);社會(huì)實(shí)踐課應(yīng)安排在每年的寒假和暑假進(jìn)行;臨床見(jiàn)習(xí)時(shí)間宜安排在進(jìn)入專業(yè)課之前;畢業(yè)實(shí)習(xí)安排在最后一學(xué)年。
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醫(yī)學(xué)美學(xué),作為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中一個(gè)新興的獨(dú)立的系統(tǒng)科學(xué)，是醫(yī)學(xué)和美學(xué)原理交叉的學(xué)科。“要求學(xué)生掌握的是如何實(shí)施對(duì)人體的美學(xué)研究、美學(xué)維護(hù)、美學(xué)修復(fù)和再塑人的健康之美”現(xiàn)代醫(yī)學(xué)美學(xué)的興起與和醫(yī)學(xué)審美的更高層次發(fā)展，促進(jìn)了研究與實(shí)踐并取得顯著成果。但是目前也出現(xiàn)了各種問(wèn)題，出現(xiàn)了很多整容美容事故，主要原因是不了解美學(xué)規(guī)律，不遵循美學(xué)規(guī)律地亂動(dòng)刀子。
三、數(shù)字媒體介入前兩者結(jié)合中的運(yùn)用前景
（一）、教學(xué)中的運(yùn)用。對(duì)整個(gè)專業(yè)知識(shí)體系的實(shí)踐教學(xué)環(huán)節(jié)進(jìn)行了改革創(chuàng)新,結(jié)合多媒體、投影儀等教學(xué)工具，利用計(jì)算機(jī)采集圖像數(shù)據(jù)、計(jì)算機(jī)圖像處理技術(shù),配合攝像機(jī)及相應(yīng)測(cè)量用軟件,作為測(cè)量分析用具,啟用醫(yī)用美學(xué)等軟件虛擬測(cè)查數(shù)據(jù)結(jié)果。使教學(xué)更直觀更具體化。
（二）是與客戶交流的運(yùn)用，面向特定的群體發(fā)展到面向特定的一個(gè)人、一個(gè)家庭的階段。即是精確化傳播階段，能和受眾（客戶）保持一對(duì)一互動(dòng)，受眾能較易獲得個(gè)性化信息，并能通過(guò)先進(jìn)的媒體及傳播技術(shù)經(jīng)濟(jì)地、方便地滿足不同受眾的個(gè)性化需求。
（三）推廣傳播的運(yùn)用。大眾傳播、分眾傳播，與精確化傳播相對(duì)應(yīng)。在互聯(lián)網(wǎng)、社交網(wǎng)站中使用網(wǎng)頁(yè)、廣告等媒體市場(chǎng)推廣體系，最大化數(shù)字媒體的營(yíng)銷效果。
四、數(shù)字媒體介入美學(xué)教學(xué)實(shí)踐的改革
（一）美學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)體系的完善
1、既要了解美學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)，又要了解醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)。美學(xué)主要包括美學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)和基本技能、人體整體美學(xué)與各部位美學(xué)分析評(píng)價(jià)技能。醫(yī)學(xué)美學(xué)主要包括實(shí)踐指導(dǎo)手冊(cè)、醫(yī)學(xué)美學(xué)概論實(shí)訓(xùn)教程等。通過(guò)綜合課程體系學(xué)習(xí)，鞏固美學(xué)和醫(yī)學(xué)美學(xué)理論課程的基本知識(shí)和基本概念。
2、要配有專門的美學(xué)與醫(yī)學(xué)美學(xué)實(shí)踐教學(xué)畫(huà)室和實(shí)驗(yàn)室，配備各種實(shí)踐教學(xué)器材。
（二）軟件與工具的廣泛使用
利用圖形軟件平面與3D結(jié)合，有效地進(jìn)行人體美學(xué)測(cè)量，分析與評(píng)價(jià)的技能應(yīng)用與實(shí)施于臨床。選用計(jì)算機(jī)、攝像機(jī)、自制攝像用頭部固位架、圖像采集卡、相應(yīng)測(cè)量用軟件,作為測(cè)量分析用具,尺子、量角規(guī)等，整形美化軟件。
（三）課程教學(xué)實(shí)踐改革
在講解分析中，多與醫(yī)生交流醫(yī)學(xué)美學(xué)的理論與原理，結(jié)合臨床實(shí)際，分析事物與美學(xué)的關(guān)系及其成因，進(jìn)行分析并提出措施或建議，培養(yǎng)學(xué)生對(duì)美學(xué)與醫(yī)學(xué)美學(xué)理論原理的應(yīng)用能力。
1、集體講解，多媒體播放，與醫(yī)生共同講解相關(guān)解剖知識(shí)，養(yǎng)成科學(xué)的觀點(diǎn)去看待和解決問(wèn)題。如頭面部的三停五眼分析與測(cè)量，對(duì)比例不協(xié)調(diào)除了使用化妝技術(shù)可以改變，還需要微整形或者手術(shù)整形改變，需要向醫(yī)生咨詢以及完全了解問(wèn)題的解決。如，瘦臉針、除皺針的恰當(dāng)使用。
2、素描示范步驟和范例作品講解。用素描方法描繪照片和寫(xiě)生對(duì)象，只有掌握了藝術(shù)手段熟練處理問(wèn)題的能力，才能更好地運(yùn)用進(jìn)行計(jì)算機(jī)圖形軟件處理出需要的效果。藝術(shù)手段和計(jì)算機(jī)的修改可能更加隨心所欲，但是醫(yī)學(xué)要遵循規(guī)律，是需要將對(duì)象的個(gè)性與標(biāo)準(zhǔn)規(guī)律反復(fù)進(jìn)行比對(duì)。審美的修養(yǎng)顯得十分重要。如。教師先分析對(duì)象特征，再示范觀察方法、比例、結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)基本手法，再讓學(xué)生分組練習(xí)，教師同時(shí)進(jìn)行巡視指導(dǎo)，培養(yǎng)學(xué)生動(dòng)手實(shí)踐能力和創(chuàng)新能力。
3、利用各種軟件分析真實(shí)照片和虛擬美容整形效果，比較各種數(shù)據(jù)在審美的差別，認(rèn)識(shí)解剖知識(shí)的重要性突出計(jì)算機(jī)的運(yùn)用能力和動(dòng)手能力的培養(yǎng)，啟發(fā)學(xué)生自己動(dòng)手，使實(shí)踐教學(xué)具有規(guī)范的動(dòng)手能力和臨床實(shí)踐操作技能。如，打開(kāi)photoshop軟件，將搜集到的照片導(dǎo)入，拉開(kāi)輔助線，選中鋼筆路徑作為傾斜鋪助線和修改的描畫(huà)。點(diǎn)擊標(biāo)尺工具進(jìn)行測(cè)量。然后采用人體模型測(cè)量或者同學(xué)之間互相進(jìn)行測(cè)量，寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告，將最后得出的結(jié)果做出虛擬效果圖。用VPSS、IFACE等軟件，目前這些軟件還不夠強(qiáng)大，需要結(jié)合photoshop軟件使用，最強(qiáng)的是韓國(guó)的3D整形軟件syncromaxplus，需要加強(qiáng)對(duì)3D軟件的學(xué)習(xí)，制作出更真實(shí)性的3D效果圖?？梢院苡行У膸椭吾t(yī)生的手術(shù)。
4、實(shí)踐課堂案例式教學(xué)。就美學(xué)與醫(yī)學(xué)美學(xué)課程教學(xué)及教育過(guò)程中的有關(guān)典型問(wèn)題，或?qū)W生關(guān)心的現(xiàn)實(shí)生活中的見(jiàn)聞，或?qū)W生自己容貌方面的憂慮煩惱等，作為實(shí)踐課堂案例來(lái)進(jìn)行教學(xué)。例如，比較典型的東西方數(shù)據(jù)差別，加強(qiáng)民族審美意識(shí)，不盲目整形。
五、專業(yè)實(shí)踐、企業(yè)實(shí)習(xí)
實(shí)行產(chǎn)學(xué)結(jié)合，在全省范圍內(nèi)確立了教學(xué)實(shí)習(xí)基地，讓學(xué)生到實(shí)習(xí)基地去見(jiàn)習(xí)實(shí)習(xí)學(xué)習(xí)，如參與美容醫(yī)院的各種美容治療或美容手術(shù)的實(shí)習(xí)見(jiàn)習(xí)，實(shí)習(xí)見(jiàn)習(xí)各階段寫(xiě)出美的切身體會(huì)與實(shí)驗(yàn)報(bào)告。參加美學(xué)與醫(yī)學(xué)美學(xué)講座、學(xué)術(shù)交流等活動(dòng)。讓學(xué)生熟悉美容業(yè)的生產(chǎn)、建設(shè)、管理、服務(wù)工作，為美容第一線職業(yè)崗位輸送高素質(zhì)的應(yīng)用型人才打下基礎(chǔ)。
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已經(jīng)成為醫(yī)療衛(wèi)生單位增強(qiáng)核心競(jìng)爭(zhēng)力和衛(wèi)生技術(shù)人員提高能力素質(zhì)的主要途徑，“十二五”計(jì)劃提出的繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育目標(biāo)基本實(shí)現(xiàn)。本文通過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)有82.8％的醫(yī)療衛(wèi)生單位開(kāi)展繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育活動(dòng)，其中100％的縣級(jí)及以上單位開(kāi)展繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育。96％被調(diào)查的衛(wèi)生技術(shù)人員在2013年已經(jīng)獲得超過(guò)25個(gè)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育學(xué)分，100％的市及省級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生單位舉辦的繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育項(xiàng)目學(xué)科（二級(jí)）。
（2）全省已經(jīng)形成運(yùn)轉(zhuǎn)靈活、層次清晰、系統(tǒng)有效的繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育組織管理體系
本次調(diào)查結(jié)果顯示，100%的醫(yī)療衛(wèi)生單位有專職人員管理繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育。96%的醫(yī)療衛(wèi)生單位制定了年度計(jì)劃并進(jìn)行工作總結(jié)，99%的醫(yī)療衛(wèi)生單位制定了繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育管理與實(shí)施辦法，初步建立起統(tǒng)一領(lǐng)導(dǎo)、分工明確、協(xié)調(diào)有力的工作機(jī)制。
（3）全省通過(guò)開(kāi)展內(nèi)容豐富、多形式的繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育活動(dòng)
激發(fā)了醫(yī)務(wù)人員的學(xué)習(xí)需要，建立了一個(gè)較好的學(xué)習(xí)平臺(tái)。本次調(diào)查結(jié)果顯示，100%的單位把繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育學(xué)分作為職稱晉升的條件，90%的單位把繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育學(xué)分作為年度考核和執(zhí)業(yè)再注冊(cè)的條件，68.8%的單位把繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育學(xué)分作為崗位聘任的條件，不僅能夠充分調(diào)動(dòng)個(gè)人和單位的積極性，還能確保繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育的質(zhì)量和水平。
2存在的主要問(wèn)題包括以下五個(gè)方面
（1）衛(wèi)生技術(shù)人員參與繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育活動(dòng)差異性較大
各個(gè)級(jí)別衛(wèi)生技術(shù)人員的技術(shù)基礎(chǔ)水平不同，基礎(chǔ)技能和基礎(chǔ)知識(shí)的水平也不同，因而需要接受的教育內(nèi)容和形式也不同。
（2）醫(yī)療衛(wèi)生單位繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育工作發(fā)展不平衡
從不同級(jí)別醫(yī)療衛(wèi)生單位來(lái)看，省市級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生單位繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育工作明顯好于縣鄉(xiāng)級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生單位，基層工作開(kāi)展較差。
（3）繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育經(jīng)費(fèi)投入不足
本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，55.9％的單位沒(méi)有專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)，44.1的單位有專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)。在參與調(diào)查的衛(wèi)生技術(shù)人員中，80％的人需要支付一半的學(xué)習(xí)費(fèi)用，49.9％的人需要花費(fèi)80％的費(fèi)用，25.8％的人花費(fèi)20％的費(fèi)用，6.8％的人不需要花費(fèi)。這說(shuō)明我們應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對(duì)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育經(jīng)費(fèi)的投入。
（4）繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育資源未得到有效利用，繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育形式還不夠豐富
本次調(diào)查結(jié)果顯示，69.2％的參加形式為網(wǎng)絡(luò)學(xué)習(xí)，18.9％為學(xué)術(shù)會(huì)議，13.6％為自學(xué)，13.2％為參加培訓(xùn)班，12.9％為函授，7.3％為脫產(chǎn)進(jìn)修。由于各級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生單位的經(jīng)濟(jì)等條件有差異，繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育的方式主要為講課，無(wú)新意，衛(wèi)生技術(shù)人員的學(xué)習(xí)情緒不夠。
（5）繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育認(rèn)識(shí)程度不夠
由于經(jīng)濟(jì)條件或繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育活動(dòng)的質(zhì)量等條件不同造成基層衛(wèi)生技術(shù)人一樣對(duì)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育的認(rèn)識(shí)程度不足。
二討論
繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育是國(guó)家實(shí)施衛(wèi)生人才戰(zhàn)略和實(shí)施“科教興國(guó)“戰(zhàn)略的重要途徑，同時(shí)其也是組成衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展的重要部分。為了更好的提高衛(wèi)生事業(yè)為人民服務(wù)的基礎(chǔ)，山東省各級(jí)衛(wèi)生行政部門都在積極發(fā)展繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育事業(yè)，積極制定繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育事業(yè)發(fā)展的措施和規(guī)劃，不斷加強(qiáng)對(duì)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育工作的領(lǐng)導(dǎo)，對(duì)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育事業(yè)的平衡發(fā)展進(jìn)行統(tǒng)籌規(guī)劃。通過(guò)本次調(diào)查研究，我們發(fā)現(xiàn)，全省范圍內(nèi)的各醫(yī)療單位繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育工作發(fā)展不平衡，部分基層醫(yī)療單位的繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育工作發(fā)展滯后。針對(duì)上述現(xiàn)象，我們應(yīng)當(dāng)建立多層次需求的繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育培養(yǎng)模式、建立繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育評(píng)價(jià)和監(jiān)督機(jī)制，為醫(yī)務(wù)人員建立良好的繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育發(fā)展環(huán)境，不斷提高全省醫(yī)學(xué)繼續(xù)教育的質(zhì)量和效率。具體如下：
（1）建立繼續(xù)學(xué)習(xí)教育評(píng)價(jià)和監(jiān)督機(jī)制
隨著繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育的不斷發(fā)展，我們應(yīng)當(dāng)不斷修訂和完善與其相關(guān)的規(guī)章制度，以便推動(dòng)全省繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育的發(fā)展。因此應(yīng)當(dāng)通過(guò)建立繼續(xù)學(xué)習(xí)教育評(píng)價(jià)和監(jiān)督機(jī)制來(lái)提高繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育的效益和治療，加強(qiáng)對(duì)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育管理人員的培訓(xùn)，確保繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育工作能夠有序的進(jìn)行。同時(shí)不斷完善醫(yī)學(xué)教育登記、考核和評(píng)估制度，將衛(wèi)生技術(shù)人員的繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育完成情況和其聘任、考核、職業(yè)資格在注冊(cè)、技術(shù)職務(wù)晉升等結(jié)合在一起。正確引導(dǎo)衛(wèi)生技術(shù)人員參加繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育活動(dòng)，并將所學(xué)學(xué)以致用。
（2）營(yíng)造良好的繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育發(fā)展患者
各級(jí)單位將開(kāi)展繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育工作作為提高自身實(shí)力的重要措施，為衛(wèi)生技術(shù)人員創(chuàng)造良好的環(huán)境和條件，使其認(rèn)識(shí)到只有接受教育才能執(zhí)業(yè)終生，激發(fā)其學(xué)習(xí)的主動(dòng)性。
（3）建立多層次需求的繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育培養(yǎng)形式
繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育工作的重點(diǎn)是堅(jiān)持以人為本，將終身教育作為其發(fā)展的宗旨，不斷對(duì)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育的內(nèi)容、機(jī)制和教學(xué)方法進(jìn)行改革，并結(jié)合各級(jí)衛(wèi)生技術(shù)人員的自身?xiàng)l件，開(kāi)展有針對(duì)性的繼續(xù)醫(yī)學(xué)教學(xué)。根據(jù)衛(wèi)生技術(shù)人員的知識(shí)層面和所在單位的條件，不斷提高醫(yī)護(hù)人員的自身素質(zhì)。同時(shí)針對(duì)基層衛(wèi)生機(jī)構(gòu)，請(qǐng)專家到基層進(jìn)行授課，進(jìn)行面對(duì)面的教學(xué)，采用座談的方式，使大家的知識(shí)相互補(bǔ)充提高。并將互聯(lián)網(wǎng)授課廣泛應(yīng)用其中，使各級(jí)學(xué)員能夠簡(jiǎn)單便捷的學(xué)習(xí)。
篇5
2網(wǎng)絡(luò)信息技術(shù)環(huán)境下的醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)檢索教學(xué)
2.1網(wǎng)絡(luò)信息技術(shù)將有效地優(yōu)化文獻(xiàn)檢索教育環(huán)境,提高教學(xué)質(zhì)量
長(zhǎng)期以來(lái),傳統(tǒng)教學(xué)模式是“以教師為中心的課堂教學(xué)結(jié)構(gòu)”,而現(xiàn)代教學(xué)需要學(xué)生掌握計(jì)算機(jī)和多媒體網(wǎng)絡(luò)信息等先進(jìn)的教學(xué)資源,以適應(yīng)信息資源和信息技術(shù)快速發(fā)展。現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)信息技術(shù)環(huán)境有利于學(xué)生主動(dòng)地掌握與熟練檢索知識(shí),充分利用各種網(wǎng)絡(luò)信息資源以生動(dòng)活波、形象逼真、多種多樣的形式進(jìn)行教學(xué)。發(fā)揮學(xué)生的主觀能動(dòng)性,突出發(fā)揮教師的引導(dǎo)、組織作用,通過(guò)網(wǎng)絡(luò)信息技術(shù)建立新型教學(xué)模式,使得學(xué)生在網(wǎng)絡(luò)信息技術(shù)的環(huán)境下充分發(fā)揮其個(gè)性、團(tuán)隊(duì)合作及創(chuàng)新能力。例如在講解“檢索技術(shù)”內(nèi)容時(shí),通過(guò)實(shí)際數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)合現(xiàn)實(shí)案例,利用網(wǎng)絡(luò)信息技術(shù)展示具體課題檢索時(shí)的工作情景,給學(xué)生以直觀、形象的感性認(rèn)識(shí)。通過(guò)一些實(shí)際案例提高學(xué)生對(duì)網(wǎng)絡(luò)信息技術(shù)下檢索知識(shí)和技能的認(rèn)知,為其今后的學(xué)習(xí)提供推動(dòng)力。
2.2網(wǎng)絡(luò)信息技術(shù)促進(jìn)醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)檢索教學(xué)內(nèi)容的改進(jìn)與設(shè)計(jì)
醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)檢索課程教學(xué)內(nèi)容是圍繞信息資源和獲取信息資源的方法與工具展開(kāi)的。在網(wǎng)絡(luò)環(huán)境下,信息資源內(nèi)容和形式都極大地?cái)U(kuò)展了;網(wǎng)絡(luò)信息檢索已成為獲取信息資源的首要且重要的渠道。因此,信息檢索課程教學(xué)任務(wù)應(yīng)主要集中在對(duì)學(xué)生網(wǎng)絡(luò)檢索利用技能的培養(yǎng)方面。醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)檢索課程的內(nèi)容可作以下調(diào)整改進(jìn):信息檢索基礎(chǔ)內(nèi)容、網(wǎng)絡(luò)基礎(chǔ)、檢索技巧及對(duì)網(wǎng)絡(luò)信息檢索工具與系統(tǒng)的總體把握。網(wǎng)絡(luò)公開(kāi)學(xué)術(shù)信息資源的獲取,學(xué)術(shù)資源導(dǎo)航及其應(yīng)用,商業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)資源系統(tǒng)的檢索方法與技巧,包括中外文數(shù)據(jù)庫(kù)檢索、中外文全文電子期刊檢索、特種文獻(xiàn)檢索等。文獻(xiàn)管理軟件可以幫助我們排列、整理、檢索、閱讀、瀏覽所搜集的大量數(shù)字文獻(xiàn)。網(wǎng)絡(luò)信息資源的綜合運(yùn)用,通過(guò)課題案例查詢的基本程序和步驟實(shí)踐,可使得學(xué)生掌握從信息獲取到信息綜合利用過(guò)程。學(xué)生通過(guò)醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)檢索課程與信息技術(shù)結(jié)合的系統(tǒng)性教學(xué)學(xué)習(xí),可以提高信息素養(yǎng),增進(jìn)交流,拓寬視野,為今后的學(xué)習(xí)和科研生涯打下良好基礎(chǔ)。
2.3多媒體教學(xué)在文獻(xiàn)檢索教學(xué)中的作用
在網(wǎng)絡(luò)環(huán)境下,信息多媒體技術(shù)作為醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)檢索教學(xué)的支持,可以充分發(fā)揮教師的主導(dǎo)作用,突出學(xué)生在實(shí)際教學(xué)中的主體地位,實(shí)現(xiàn)師生相互交流,提高實(shí)際教學(xué)質(zhì)量和效率。網(wǎng)絡(luò)信息技術(shù)環(huán)境下,通過(guò)多媒體互動(dòng)資源,生動(dòng)形象地將生澀難懂的理論變?yōu)樯鷦?dòng)的圖像,能激發(fā)每一位學(xué)生的學(xué)習(xí)熱情和興趣,真正快速提高學(xué)習(xí)效率。多媒體教學(xué)可以發(fā)揮網(wǎng)絡(luò)信息傳輸功能,醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)檢索課是以了解基本檢索概念、掌握信息檢索技術(shù)和技巧為主。如果教師只是講解和演示,學(xué)生就很難理解,沒(méi)有具體形象的認(rèn)識(shí),就不能夠理解信息檢索意義所在。多媒體課件的動(dòng)態(tài)演示會(huì)使得抽象知識(shí)變得直觀形象,可以進(jìn)一步培養(yǎng)學(xué)生的信息思維能力、綜合分析處理信息能力以及解決實(shí)際問(wèn)題的能力,并最終形成自我觀察分析的能力。
2.4充分利用網(wǎng)絡(luò)信息技術(shù),保持醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)檢索課程內(nèi)容的前沿性
篇6
(3)醫(yī)學(xué)教學(xué)素材眾多，難以長(zhǎng)期保存。
(4)醫(yī)學(xué)知識(shí)繁瑣、復(fù)雜，課堂上老師苦于難把大量的知識(shí)傳授于大家，多數(shù)老師一味填鴨式的講授，不僅不會(huì)增加學(xué)生學(xué)習(xí)的效率，還會(huì)使學(xué)生產(chǎn)生厭煩情緒。學(xué)習(xí)資源和信息。
2多媒體技術(shù)在醫(yī)學(xué)教學(xué)中的重要性
(1)計(jì)算機(jī)多媒體技術(shù)把枯燥無(wú)味的知識(shí)形象、滿足不同學(xué)生的不同需要，使得學(xué)生在一定時(shí)間內(nèi)盡可能獲取更多的知識(shí)。
(2)多媒體技術(shù)可以節(jié)省板書(shū)時(shí)間，大大提高了課堂效率，還可以增加與老師溝通互動(dòng)的機(jī)會(huì)。
(3)多媒體技術(shù)的應(yīng)用改變了傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)教學(xué)過(guò)程單調(diào)枯燥的局面，完全可以在課下依靠網(wǎng)絡(luò)加強(qiáng)學(xué)習(xí)，而且多媒體技術(shù)實(shí)現(xiàn)了資源的共享，為學(xué)生提供了更多的
3多媒體教學(xué)在醫(yī)學(xué)教學(xué)中應(yīng)注意的事項(xiàng)
多媒體教學(xué)在醫(yī)學(xué)教學(xué)中產(chǎn)生了重大的變革，但是，應(yīng)用多媒體時(shí)，應(yīng)將多媒體作為教學(xué)的助力，不能成為教學(xué)的絆腳石。所以，使用多媒體技術(shù)時(shí)，應(yīng)注意以下幾個(gè)方面。
(1)避免遏制學(xué)生的想象力。這就造成教師在課堂上過(guò)多的進(jìn)行電腦操作，引導(dǎo)學(xué)生按照課件的指示進(jìn)行學(xué)習(xí)，在一定程度上抑制了學(xué)生的想象力。
(2)避免重回填鴨式教學(xué)。多媒體技術(shù)的廣泛應(yīng)用使教師的板書(shū)量大大減少，造成學(xué)生沒(méi)有足夠的時(shí)間進(jìn)行思考，導(dǎo)致教師無(wú)法全面的掌握學(xué)生學(xué)習(xí)的具體情況，對(duì)于教學(xué)中存在的問(wèn)題不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和改正。
(3)避免過(guò)度依賴多媒體教學(xué)，使教師學(xué)生之間失去互動(dòng)性。學(xué)生也不會(huì)再認(rèn)真地去做筆記，整理自己的學(xué)習(xí)思路和知識(shí)體系，而是變得更愿意去依賴拷貝教師的教學(xué)資料。
篇7
學(xué)生給予口腔正畸工藝技術(shù)課程高度的學(xué)習(xí)熱情及關(guān)注，能夠清醒認(rèn)識(shí)到行業(yè)企業(yè)對(duì)于口腔正畸專業(yè)人才的迫切需求，因此對(duì)于課程的學(xué)習(xí)較為認(rèn)真、踏實(shí)。但本次調(diào)查顯示，學(xué)生對(duì)于理論知識(shí)部分的掌握程度不盡如人意，究其原因，主要在于本課程采用傳統(tǒng)理實(shí)分開(kāi)授課的教學(xué)模式，學(xué)生對(duì)于抽象的理論知識(shí)理解難度較大，理論授課結(jié)束后開(kāi)展實(shí)訓(xùn)時(shí)，存在理論知識(shí)部分遺忘的現(xiàn)象。理論與實(shí)驗(yàn)教學(xué)銜接不當(dāng)[2]是一個(gè)急需通過(guò)教學(xué)模式調(diào)整及課程教學(xué)改革解決的問(wèn)題。
3課程地位隨行業(yè)發(fā)展而變化
隨著人們生活水平的日益提高，對(duì)于口腔健康的要求已不僅僅局限于“無(wú)病”，而更多著眼于美觀與功能良好，這使得口腔正畸治療得到了越來(lái)越多的關(guān)注，也使得口腔正畸技術(shù)得以迅猛發(fā)展，越來(lái)越多的人選擇口腔正畸治療。與此同時(shí)，口腔正畸技術(shù)的發(fā)展也帶動(dòng)著口腔正畸修復(fù)專業(yè)技術(shù)的不斷發(fā)展及變革，使得行業(yè)企業(yè)對(duì)于口腔正畸專業(yè)人才的需求不斷提升，口腔正畸修復(fù)專業(yè)技術(shù)人才緊缺的問(wèn)題日益明顯，這對(duì)于口腔醫(yī)學(xué)技術(shù)專業(yè)人才的培養(yǎng)提出了全新的、更高的要求?？谇徽に嚰夹g(shù)課程無(wú)形中從一門普通的專業(yè)課程變成一門直接關(guān)系畢業(yè)生就業(yè)的專業(yè)核心課程，口腔正畸工藝技術(shù)也成為越來(lái)越多相關(guān)企業(yè)希望畢業(yè)生熟練掌握的專業(yè)技能。
4課程設(shè)置及教學(xué)模式改革的重要性
就口腔正畸工藝技術(shù)課程來(lái)看，其發(fā)展相對(duì)于其他專業(yè)核心課程慢，授課方式依舊沿用傳統(tǒng)的理論實(shí)驗(yàn)分開(kāi)教授的教學(xué)模式，弊端顯而易見(jiàn)。為更好地滿足行業(yè)企業(yè)對(duì)口腔正畸工藝技術(shù)專業(yè)人才知識(shí)與技能的要求，調(diào)整課程設(shè)置、進(jìn)行教學(xué)模式改革已經(jīng)刻不容緩。教學(xué)做一體化教學(xué)模式[4]在其他專業(yè)核心課程中教學(xué)效果良好，也積累了一定的經(jīng)驗(yàn)，但由于每門課程都有其自身的特點(diǎn)及特殊性，把其他課程適合的教學(xué)模式照搬過(guò)來(lái)并不一定適合。因此，需要分析教學(xué)做一體化教學(xué)模式在其他核心課程中開(kāi)展的情況，依據(jù)行業(yè)企業(yè)對(duì)于專業(yè)人才知識(shí)結(jié)構(gòu)的要求，探索有口腔正畸工藝技術(shù)課程特色的教學(xué)做一體化教學(xué)模式，改變?cè)械睦碚撆c實(shí)驗(yàn)教學(xué)脫離的教學(xué)組織形式，這對(duì)于培養(yǎng)高素質(zhì)、技能型專業(yè)人才至關(guān)重要。
篇8
2.1實(shí)驗(yàn)診斷前的準(zhǔn)備工作
首先實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)人員必須提高自己的知識(shí)水平，不斷學(xué)習(xí)，鉆研專業(yè)技能，經(jīng)常去醫(yī)院了解醫(yī)學(xué)發(fā)展動(dòng)態(tài)，以便使教學(xué)與臨床實(shí)踐緊密結(jié)合，從而獲得更多、更新的知識(shí)。其次，上課前要熟悉每個(gè)實(shí)驗(yàn)的目的、要求、試劑配制、用具的準(zhǔn)備、提前預(yù)示，以掌握實(shí)驗(yàn)診斷的全過(guò)程和預(yù)計(jì)可能出現(xiàn)的問(wèn)題。例如，微生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課中如果標(biāo)本制作的結(jié)構(gòu)不清楚、不典型、染色模糊、有人工假象，那么學(xué)生觀察起來(lái)則很吃力，不能獨(dú)立找到所要了解和掌握的結(jié)構(gòu)內(nèi)容。還有在進(jìn)行細(xì)菌生化鑒定方面實(shí)驗(yàn)時(shí)，如果沒(méi)有進(jìn)行預(yù)示，不知道細(xì)菌培養(yǎng)生長(zhǎng)的情況如何，實(shí)驗(yàn)診斷中出現(xiàn)的問(wèn)題就很難給學(xué)生解釋，這就必然影響學(xué)生的實(shí)驗(yàn)情緒，影響實(shí)驗(yàn)診斷結(jié)果。因此實(shí)驗(yàn)診斷前的準(zhǔn)備工作至關(guān)重要。
2.2運(yùn)用實(shí)驗(yàn)診斷教學(xué)方案
傳統(tǒng)的教學(xué)模式往往是教師牽著學(xué)生的鼻子走，多以“滿堂灌”方式指導(dǎo)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，故導(dǎo)致學(xué)生有依賴心理，不動(dòng)腦思考，對(duì)實(shí)驗(yàn)診斷過(guò)程及結(jié)果不甚明傳統(tǒng)的教學(xué)模式往往是教師牽著學(xué)生的鼻子走，多以“滿堂灌”方式指導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，故導(dǎo)致學(xué)生有依賴心理，不動(dòng)腦思考，對(duì)實(shí)驗(yàn)診斷過(guò)程及結(jié)果不甚明了，從而使整個(gè)實(shí)驗(yàn)課效果不理想。近年來(lái)，我們?cè)诮虒W(xué)中開(kāi)展了綜合性實(shí)驗(yàn)診斷教學(xué)，即學(xué)生獨(dú)立設(shè)計(jì)和完成一次實(shí)驗(yàn)，教師只提供必要的器材和試劑，提出實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)要求和操作事項(xiàng)。
2.3做好實(shí)驗(yàn)診斷的考核方法
以往實(shí)驗(yàn)成績(jī)的考核，過(guò)分依賴報(bào)告的優(yōu)劣，導(dǎo)致學(xué)生不注重實(shí)驗(yàn)過(guò)程，片面追求實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確性和實(shí)驗(yàn)報(bào)告的篇幅與整潔程度，嚴(yán)重制約了對(duì)學(xué)生綜合素質(zhì)的培養(yǎng)，導(dǎo)致學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)課的不重視，不當(dāng)回事。近幾年我們將實(shí)驗(yàn)課獨(dú)立出來(lái)，成為單獨(dú)的一門課后，學(xué)生普遍重視起來(lái)，提高了他們對(duì)實(shí)驗(yàn)的重視程度，調(diào)動(dòng)了他們學(xué)習(xí)的積極性，保證了成績(jī)?cè)u(píng)定的客觀和公正、提高了實(shí)驗(yàn)的教學(xué)效果。
3展望
篇9
2．1模板DNA提取和質(zhì)量檢測(cè)
模板DNA提取的方法有很多，應(yīng)根據(jù)組織的不同和試驗(yàn)需要確定，但其基本的原理相同，都是通過(guò)酶或有機(jī)試劑裂解組織使核酸游離出來(lái)，然后通過(guò)有機(jī)溶劑或吸附柱純化后提取。核酸的濃度和質(zhì)量可通過(guò)UV分光光度計(jì)讀取D260nm與D280nm的比值和1％瓊脂糖凝膠電泳等檢測(cè)來(lái)確定（Mohini等，2011）。目前已有很多商品化的核酸提取試劑盒可供選擇，使用方便并可得到較高質(zhì)量的模板（DNA或cDNA）。
2．2隨機(jī)引物的選擇
隨機(jī)引物長(zhǎng)度通常為10個(gè)堿基，GC的含量為60％～80％的寡聚核苷酸鏈，隨機(jī)引物不僅核苷酸的排列順序是隨機(jī)的，而且所有引物的序列無(wú)直接相關(guān)性（韋莉萍，2001）。理論上，如果1條隨機(jī)引物反應(yīng)可產(chǎn)生x個(gè)獨(dú)立的條帶，那么a條隨機(jī)引物同時(shí)參與反應(yīng)就可得到xa2個(gè)條帶，但多條引物同時(shí)參與反應(yīng)會(huì)相應(yīng)的增加結(jié)果的復(fù)雜性和不穩(wěn)定性（Nandani等，2014）。隨機(jī)引物雖然可用于所有物種，但并不是所有的隨機(jī)引物擴(kuò)增出來(lái)的結(jié)果都有意義，想要得到較為理想的結(jié)果仍需根據(jù)研究對(duì)象和研究目的進(jìn)行引物的篩選和反應(yīng)條件的優(yōu)化，一般來(lái)說(shuō)選擇能產(chǎn)生中等復(fù)雜度的圖譜的引物（Nandani等，2014）。
2．3AP－PCR擴(kuò)增條件
AP－PCR也包括變性、退火、延伸的經(jīng)典PCR過(guò)程。變性過(guò)程在94℃進(jìn)行，一般來(lái)說(shuō)預(yù)變性3～5min；退火溫度在35～38℃，也可根據(jù)引物Tm值來(lái)確定，一般退火溫度比引物Tm值低3～5℃；延伸溫度在72℃，在此溫度下Taq酶的合成效率約為2000bp／min（Kumari等，2013）。AP－PCR的試驗(yàn)條件、模板的質(zhì)量和濃度及反應(yīng)體系中Mg2＋的濃度等都可能對(duì)擴(kuò)增的結(jié)果產(chǎn)生影響，想要得到較為理想的試驗(yàn)結(jié)果，反應(yīng)體系的優(yōu)化和試驗(yàn)操作的標(biāo)準(zhǔn)化是非常重要的（Mohini等，2011；Kumari等，2013；Babu等，2014）。
2．4AP－PCR的優(yōu)點(diǎn)
AP－PCR延續(xù)了PCR的效率高、靈敏度高、樣品用量少等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)又兼有自身的優(yōu)點(diǎn)：①不同種類的生物樣品即可使用通用的隨機(jī)引物進(jìn)行基因分析（Welsh等，1991）；②可在對(duì)研究對(duì)象不了解的情況下進(jìn)行基因多態(tài)性分析，從而對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行遺傳分析和分類研究（Williams等，1990；Welsh等，1991）；③對(duì)于研究對(duì)象DNA樣品量有限的情況也適用（Nandani等，2014）；④隨機(jī)引物易獲得，試驗(yàn)成本低，技術(shù)容易掌握，除此之外，可對(duì)AP－PCR產(chǎn)生的基因條帶進(jìn)行純化和克隆，以便進(jìn)一步分析（Ge等，2014）。
2．5AP－PCR的局限性
AP－PCR雖然具有很多獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，但目前仍處于應(yīng)用的探索階段，其本身仍有局限性：①AP－PCR技術(shù)通常是對(duì)顯性基因標(biāo)記進(jìn)行分析，這就意味著不能將純合子與雜合子區(qū)別開(kāi)（Babu等，2014）；②由于無(wú)明確的目的序列，如果發(fā)生擴(kuò)增條帶的缺失就無(wú)法得知是什么原因?qū)е碌?，不利于?duì)擴(kuò)增結(jié)果的分析（Kumari等，2013）；③AP－PCR的結(jié)果分析需要專業(yè)的帶譜分析知識(shí)，否則很難從結(jié)果中得到有意義的信息；④AP－PCR結(jié)果的重復(fù)性問(wèn)題一直是限制其廣泛應(yīng)用的主要原因，由于其結(jié)果受DNA模板的質(zhì)量、反應(yīng)體系成分和反應(yīng)條件的變化等因素的影響，其擴(kuò)增產(chǎn)物的穩(wěn)定性難以控制（Mohini等，2011）；⑤AP－PCR結(jié)果通過(guò)凝膠電泳來(lái)觀察，但遷移率相同的譜帶的核苷酸同源型不明等情形易造成干擾，有時(shí)電泳遷移率相同的片段并非同源，這就給結(jié)果分析帶來(lái)很多不確定性（Nandani等，2014）。
3、AP－PCR技術(shù)研究進(jìn)展
3．1AP－PCR技術(shù)自身的優(yōu)化
近年來(lái)，不斷有研究者對(duì)AP－PCR技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)和優(yōu)化，使其更具可操作性、實(shí)用性和更廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域。劉剛等（2004）對(duì)AP－PCR進(jìn)行了優(yōu)化，建立了多重隨機(jī)引物PCR（M－RAPD）技術(shù)，M－RAPD通過(guò)使用3條組合的隨機(jī)引物在較高的退火溫度下對(duì)肺炎鏈球菌、糞腸球菌和大腸埃希菌耐藥菌株等的染色體DNA進(jìn)行擴(kuò)增獲得了穩(wěn)定的種株特異性的DNA指紋圖，其所提供的基因信息要遠(yuǎn)多于傳統(tǒng)的RAPD技術(shù)。Xiong等（2012）對(duì)AP－PCR進(jìn)行了反應(yīng)程序優(yōu)化和隨機(jī)引物中G／（G＋C）不同比例研究，結(jié)果表明，反應(yīng)程序中從退火步驟到延伸步驟的時(shí)間延長(zhǎng)，溫度變化由3℃／s下降到0．3℃／s時(shí)，PCR產(chǎn)物條帶明顯增加，這可能是由于延長(zhǎng)溫度變化的時(shí)間可提高引物與模板結(jié)合的穩(wěn)定性（Fu等，2000），在比較了隨機(jī)引物中G／（G＋C）不同比例的PCR產(chǎn)物后發(fā)現(xiàn)，當(dāng)G／（G＋C）比例在0．7時(shí)PCR產(chǎn)物的條帶最多，也更適用于進(jìn)行AP－PCR反應(yīng)，因此反應(yīng)程序的溫度變化和隨機(jī)引物中G／（G＋C）的比例可能也是影響AP－PCR結(jié)果的重要因素。Zou等（2003）報(bào)道了利用兩步AP－PCR方法在微量DNA樣品中擴(kuò)增未知序列DNA并進(jìn)行克隆。第1步PCR利用29個(gè)核苷酸序列的引物進(jìn)行擴(kuò)增，Ran5－29（5′－GTTCTACACGAGTCACTGCA－GNNNNNNNTGGC－3′），這一隨機(jī)引物包括21個(gè)已知核苷酸序列部分，7個(gè)隨機(jī)核苷酸序列和1個(gè)3′端TGGC的卡子結(jié)構(gòu)，在隨機(jī)序列前6個(gè)核苷酸序列構(gòu)成了1個(gè)PstⅠ位點(diǎn)，其中3′端卡子結(jié)構(gòu)在退火時(shí)可與含有GCCA位點(diǎn)結(jié)合，保證了隨機(jī)序列可與GCCA上游的序列匹配，3′端TGGC的卡子結(jié)構(gòu)可使引物與模板的匹配數(shù)增加7～11個(gè)核苷酸，PstⅠ位點(diǎn)決定PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度，并保留1個(gè)黏性末端，保證了克隆的順利進(jìn)行。第2步PCR使用可與Ran5－29相匹配的19個(gè)核苷酸的Fix5－29（5′－GTTCTACACGAGTCACTGC－3′）作為引物，獲得的產(chǎn)物進(jìn)行純化、克隆分析。結(jié)果表明這種策略可檢測(cè)臨床樣本DNA的最小量在1pg，克隆靈敏度達(dá)到100fg目的DNA模板。這種方法較普通AP－PCR靈敏度更高，適用于樣本量極少的臨床樣品檢測(cè)。Clem等（2007）在對(duì)比了AP－PCR方法的不同擴(kuò)增策略，在此基礎(chǔ)上建立一種快速有效的檢測(cè)不明病原的多重隨機(jī)RT－PCR方法。在對(duì)血液樣本進(jìn)行過(guò)濾后加入了DNase和RNase消化，利用宿主基因?qū)Nase和RNase敏感而衣殼保護(hù)的病毒對(duì)其不敏感的特點(diǎn)，去除宿主自身基因的污染。其利用單一十聚核苷酸為引物，引物序列為（V8A2）5′－VVVVVVVVAA－3′，V＝A、G或C，3′2個(gè)A提供了一個(gè)“l(fā)ock”結(jié)構(gòu)，引物中不含有胸腺嘧啶脫氧核苷酸（T）可避免發(fā)生引物二聚體，但這一結(jié)構(gòu)不可避免的會(huì)影響引物與模板的結(jié)合。試驗(yàn)結(jié)果一旦監(jiān)測(cè)到病毒的擴(kuò)增產(chǎn)物即可通過(guò)鳥(niǎo)槍法克隆測(cè)序鑒定。這一方法對(duì)病毒的出現(xiàn)或重組進(jìn)行快速監(jiān)測(cè)和鑒定有很強(qiáng)的實(shí)用性，其檢測(cè)靈敏度達(dá)到1000克?。痬L，應(yīng)用這一技術(shù)成功從血液樣品中檢測(cè)并獲得了3種獨(dú)立病毒的部分序列。
3．2以AP－PCR為基礎(chǔ)衍生的分子生物學(xué)技術(shù)
隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，單一的AP－PCR技術(shù)已不能滿足研究的需要，因此為了克服AP－PCR的一些缺點(diǎn)在其基礎(chǔ)上衍生出包括非序列依賴單引物PCR（SISPA）、簡(jiǎn)并核苷酸引物PCR（DOP－PCR）、DNA擴(kuò)增指紋印記（DAF）、微衛(wèi)星引物PCR（MP－PCR）等分子生物學(xué)技術(shù)。SISPA方法最早是由Reyes等（1991）建立起來(lái)的，其以AP－PCR為基礎(chǔ)，非對(duì)稱的單一引物與DNA模板的鈍末端直接連接，隨后經(jīng)過(guò)若干循環(huán)的變性、退火和延伸后，模板的數(shù)量得到擴(kuò)增，后經(jīng)克隆、測(cè)序、分析得到基因序列。Breitbart等（2005）在SISPA的基礎(chǔ)上建立了DNase－SISPA聯(lián)用的方法，增加了樣品過(guò)濾和DNA酶消化等步驟，成功的從人的血液臨床樣品中發(fā)現(xiàn)了新的病毒基因。Djikeng等（2008）在已有研究基礎(chǔ)上進(jìn)行了新的改進(jìn)，在樣品的處理中加入RNase酶以清除外源RNA的污染如核糖體RNAs。針對(duì)有polyA尾的病毒，在反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中加入六聚核苷酸隨機(jī)引物5′端加入一段病毒特異性引物序列，形成結(jié)合引物（FR26RV－N：5′－GCCGGAGCTCTGCAGATATC－NNNNNN－3′），同時(shí)加入連接polyT的引物（FR40RV－T：5′－GCCGGAGCTCTGCAGATATC－TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT－3′）以增加對(duì)病毒基因3′端的覆蓋率。這種在六聚體隨機(jī)引物連接一保守序列即病毒特異性引物，可增加對(duì)病毒基因5′的捕獲，從而使SISPA的成功率大大提高。DOP－PCR技術(shù)是在AP－PCR基礎(chǔ)上建立起來(lái)，其引物（DOP－ORI－Xho）由22個(gè)核苷酸組成，3′和5′端的特異核苷酸序列和中間的6個(gè)核苷酸構(gòu)成的隨機(jī)引物組成（Telenius等，1992）。由于隨機(jī)引物的簡(jiǎn)并性，每個(gè)反應(yīng)包含著數(shù)以千對(duì)的引物。DOP－PCR的反應(yīng)程序包含2個(gè)不同的部分，前5個(gè)循環(huán)引物的3′端至少有12個(gè)連續(xù)的核苷酸與模板DNA相結(jié)合，對(duì)引物和模板的匹配度要求不高，在隨后的30～40個(gè)循環(huán)里，擴(kuò)增錯(cuò)配的幾率會(huì)逐漸降低。初始反應(yīng)產(chǎn)物將成為模板，用相同的引物進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)克隆測(cè)序即可獲得基因序列（韓燾等，2013）。Csaba等（2002）打破了DOP－PCR只用同一種引物的傳統(tǒng)，嘗試了5條新的可用于反應(yīng)的引物，使反應(yīng)時(shí)間由原來(lái)的7～8h縮短為2h，縮短了變性過(guò)程的時(shí)間，在取得理想結(jié)果的同時(shí)，減少了擴(kuò)增酶的用量，提高了DOP－PCR的效率和實(shí)用性。DAF是一種改進(jìn)的AP－PCR分析技術(shù)，與AP－PCR技術(shù)不同的是，DAF使用的引物濃度更高，長(zhǎng)度更短（約5～8個(gè)堿基），在PCR反應(yīng)上只包含2個(gè)溫度的循環(huán)，省去了延伸的步驟，使用聚丙烯酰胺凝膠電泳，通過(guò)銀染方法觀察結(jié)果。DAF通常會(huì)產(chǎn)生非常復(fù)雜的帶型，因此它所提供的譜帶信息也比AP－PCR大得多（Caetano－Anolles等，1993）。Al－h(huán)ag等（2007）應(yīng)用DAF鑒定8株細(xì)胞系，研究結(jié)果表明，DAF可產(chǎn)生穩(wěn)定的可供區(qū)分的PCR譜帶。Ehsan等（2011）應(yīng)用DAF技術(shù)對(duì)分離到的25株牛隱孢子蟲(chóng)進(jìn)行亞型的鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離的25個(gè)蟲(chóng)株分屬于為3個(gè)不同的亞型。MP－PCR是以AP－PCR為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記技術(shù)。Ma等（1996）發(fā)現(xiàn)真核生物基因組中存在短串聯(lián)重復(fù)序列，又稱微衛(wèi)星DNA或簡(jiǎn)單重復(fù)序列（simplesequencerepeats，SSR）。真核生物基因組中SSR的分布是隨機(jī)的，大約每隔10～50kb就有1個(gè)SSR。SSR位點(diǎn)最常見(jiàn)是雙核苷酸重復(fù)，即（CA）n和（TG）n，每個(gè)微衛(wèi)星DNA的核心序列結(jié)構(gòu)相同，重復(fù)單位數(shù)目10～60個(gè)。MP－PCR的引物是與SSR位點(diǎn)互補(bǔ)的二聚或三聚核苷酸重復(fù)序列，如其引物序列可是（TA）10或（CGA）6，擴(kuò)增的是SSR之間不同長(zhǎng)度的DNA序列，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳，根據(jù)分離片段的大小決定基因型并計(jì)算等位基因頻率（Dawson等，2013）。MP－PCR克服了AP－PCR引物的不確定性，增加了PCR產(chǎn)物譜帶的穩(wěn)定性和針對(duì)性，該技術(shù)也已廣泛應(yīng)用于物種分子標(biāo)記、基因圖譜繪制和基因差異性分析等方面（Tian等，2014；Ding等，2014；Wei等，2014）。
3．3AP－PCR與其他分子生物學(xué)技術(shù)的聯(lián)用
擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（AFLP）技術(shù)是將基因組DNA先用限制性內(nèi)切酶切割，然后將雙鏈接頭連接到DN段的末端，接頭序列和相鄰的限制性位點(diǎn)序列，作為引物結(jié)合位點(diǎn)（Rikalainen，2013）。針對(duì)AP－PCR結(jié)果譜帶核苷酸同源性無(wú)法確定的缺點(diǎn)，Tan等（2011）將AP－PCR與AFLP進(jìn)行聯(lián)用，利用2種方法各自的優(yōu)勢(shì)，在對(duì)可能含有未知病原的臨床樣品進(jìn)行檢測(cè)，以實(shí)驗(yàn)室確診的登革1型病毒為陽(yáng)性對(duì)照，首先用AP－PCR對(duì)有限的樣品基因進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增，然后使用AFLP技術(shù)對(duì)進(jìn)行擴(kuò)增從而得到樣品穩(wěn)定的DNA多態(tài)性標(biāo)記。此方法克服了AP－PCR的同源性不明問(wèn)題，同時(shí)比單獨(dú)使用的AFLP方法進(jìn)行檢測(cè)的靈敏度提高100倍，在臨床樣品的檢測(cè)中有很大的實(shí)用價(jià)值。高通量的測(cè)序技術(shù)也被稱為下一代的測(cè)序技術(shù)，其與AP－PCR技術(shù)的配合使用，讓AP－PCR有了更廣闊的應(yīng)用前景。Hang等（2012）首先使用錨定隨機(jī)引物P17N8（5′－GTTTCCCAGTAGGTCT－CNNNNNNNN－3′）進(jìn)行RNA反轉(zhuǎn)錄，在通過(guò)錨定隨機(jī)引物P17N8和P21（5′－CGCCGTTTCCCAG－TAGGTCTC－3′）同時(shí)進(jìn)行AP－PCR擴(kuò)增，再通過(guò)高通量的測(cè)序技術(shù)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，對(duì)得到的基因序列進(jìn)行拼接處理，從而得到了奧羅普切病毒和卡拉帕魯病毒L片段完整基因序列。vanderHeij－den等（2012）利用序列非依賴性病毒基因片段擴(kuò)增方法與Roche－454測(cè)序技術(shù)聯(lián)用，成功的從患急性肝炎病犬的肝臟組織檢測(cè)出犬Ⅰ型腺病毒基因，研究結(jié)果表明AP－PCR技術(shù)和下一代的測(cè)序技術(shù)聯(lián)合使用的方法在獲得病毒完整基因序列和檢測(cè)病原等方面的實(shí)用性。
4、AP－PCR技術(shù)在動(dòng)物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用
4．1在傳染病流行病學(xué)和病原遺傳學(xué)分類中的應(yīng)用AP－PCR由于其獨(dú)特的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，在獸醫(yī)傳染病學(xué)和病原遺傳學(xué)分類中已得到廣泛應(yīng)用。Leh－marn等（1992）用此技術(shù)對(duì)念珠菌屬的分離菌進(jìn)行分析，試驗(yàn)結(jié)果表明，同一菌種的不同菌型間呈現(xiàn)出DNA長(zhǎng)度的多態(tài)性；此帶型圖在同一菌種的不同菌型間，其相似程度遠(yuǎn)大于不同種的菌株，這也說(shuō)明每種菌的隨機(jī)引物PCR帶型極具特征性。Louie等（1996）用2種引物檢查15株李斯特單核菌相關(guān)流行分離株和36株不相關(guān)流行分離株。經(jīng)擴(kuò)增后的帶型分析，將其分為9個(gè)型，每個(gè)型中又分有不同的亞型。Zadoks等（2000）在牛乳樣品中分離到23株金黃色葡萄球菌，經(jīng)AP－PCR鑒定1～8株屬于Ⅰ型菌，9～20株屬于Ⅱ型菌，其余3株分別屬于Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型菌。Butler等（2001）應(yīng)用該技術(shù)對(duì)3次牛霉形體暴發(fā)流行菌株進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明，發(fā)生在其中2個(gè)養(yǎng)牛場(chǎng)的流行病原菌具有一致的指紋圖，引而具有相同的感染來(lái)源，而在另一牛場(chǎng)分離的菌株間則顯示了指紋圖譜的顯著異型性，說(shuō)明它們具有多個(gè)感染來(lái)源。王雪敏等（2011）利用多組隨機(jī)引物對(duì)副雞禽桿菌10個(gè)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株、血清C型疫苗株和4個(gè)國(guó)內(nèi)分離株進(jìn)行AP－PCR擴(kuò)增，結(jié)果顯示，所有菌株可分為11個(gè)譜型，聚為4類。劃分的11個(gè)譜型可和現(xiàn)有分型方法中的不同亞型一一對(duì)應(yīng)，提示這種方法可區(qū)分不同血清亞型。AP－PCR作為寄生蟲(chóng)遺傳學(xué)分類鑒定的方法已得到廣泛應(yīng)用，克服了傳統(tǒng)分類方法難以解決的問(wèn)題。Macph－eson等（1993）應(yīng)用AP－PCR技術(shù)區(qū)分來(lái)自不同宿主的7種艾美爾球蟲(chóng)，結(jié)果表明選擇合適的引物可對(duì)7種球蟲(chóng)進(jìn)行鑒別。張偉信等（2003）應(yīng)用該技術(shù)對(duì)雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)不同地理株的多態(tài)性研究，結(jié)果表明不同地理株間及同一地理株親代與子代間均存在DNA多態(tài)性差異，其中不同地理株間種內(nèi)變異程度較大，同一地理株子代與親代間也發(fā)生遺傳變異，但變異程度較小。
4．2在病原差異基因分析中的應(yīng)用
AP－PCR技術(shù)進(jìn)行RNA指紋圖譜分析不僅能鑒定基因的表達(dá)差異，而且能顯示低水平表達(dá)的基因差異。Nicho－las（2000）應(yīng)用此方法鑒定了絲裂霉素C誘導(dǎo)下鼠傷寒沙門氏菌SOS調(diào)控基因表達(dá)的差異，結(jié)果表明，絲裂霉素C誘導(dǎo)后21條基因譜帶出現(xiàn)表達(dá)水平的上調(diào)，其中20個(gè)基因片段對(duì)應(yīng)的是可辨識(shí)的基因序列，15個(gè)基因序列與數(shù)據(jù)庫(kù)中基因序列無(wú)同源性，被確定為新的表達(dá)序列，6個(gè)基因片段與SOS基因編碼的調(diào)控蛋白有關(guān)。Diana等（2005）應(yīng)用AP－PCR技術(shù)對(duì)芐硝唑作用下克氏錐蟲(chóng)基因表達(dá)差異多態(tài)性的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)芐硝唑敏感和對(duì)芐硝唑抵抗種群之間系統(tǒng)指紋圖譜存在一定的差異，其中可能存在克氏錐蟲(chóng)對(duì)芐硝唑擁有抗性的表達(dá)機(jī)制，雖然抗性種群在芐硝唑作用下系統(tǒng)指紋圖譜沒(méi)有明顯的變化，但敏感種群間的系統(tǒng)指紋圖譜卻有著明顯的變化。AP－PCR技術(shù)為鑒定基因差異提供了一種快速有效的方法。
4．3在未知病原檢測(cè)中的應(yīng)用
病原微生物引起的動(dòng)物疫病呈現(xiàn)出復(fù)雜性和非典型性等特征，普通的臨床診斷方法很難確定病原的種類，這種情況下使用傳統(tǒng)PCR方法檢測(cè)臨床樣品的效率不高，而且存在漏檢可能。AP－PCR技術(shù)提供了一個(gè)更為全面、快速和靈活的檢測(cè)方法，對(duì)病原微生物進(jìn)行全基因組的檢測(cè)（姚四新等，2010）。Djikeng等（2008）使用DNase－SISPA技術(shù)在牛的血清中分離到牛鼻病毒基因。Clem等（2007）利用改進(jìn)的AP－PCR方法，從血液樣品中檢測(cè)并獲得了3種獨(dú)立病毒的部分序列，即腺病毒17、卡薩奇病毒A7和呼吸道合包體病毒B。周斌等（2004）在研究鴨病毒性肝炎病毒時(shí)，發(fā)現(xiàn)其種毒可能受到污染，隨后挑選4條隨機(jī)引物對(duì)其進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增，共擴(kuò)增出3條基因片段?？寺y(cè)序的結(jié)果表明，與禽腺病毒（雞胚致死孤兒病毒）基因組部分序列同源性分別高達(dá)99．5％、99．6％和99．5％，從而確定了鴨病毒性肝炎病毒雞胚尿囊液種毒受到禽腺病毒的污染。黃欣梅等（2011）采用DNase－SISPA對(duì)導(dǎo)致鴨、鵝產(chǎn)蛋下降的病原基因進(jìn)行擴(kuò)增，并在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)了1對(duì)特異性引物成功的擴(kuò)增出新型鵝黃病毒JS804毒株基因。
篇10
光聲斷層成像系統(tǒng)采用非聚焦激光照射樣品，并采用非聚焦超聲換能器檢測(cè)被樣品照射區(qū)域周圍的光聲信號(hào)，從檢到的光聲信號(hào)，反演出成像區(qū)域生物組織的光吸收系數(shù)的空間分布，并且由此繪制組織被照射區(qū)域的光聲圖像。一般在光聲斷層成像的實(shí)驗(yàn)研究中，為了簡(jiǎn)化系統(tǒng)的復(fù)雜程，減少實(shí)驗(yàn)成本，提高實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性，往往采用一個(gè)超聲換能器對(duì)生物組織進(jìn)行旋轉(zhuǎn)掃描。
美國(guó)圣路易斯華盛頓大學(xué)的LiHongVWang在2003年時(shí)帶領(lǐng)研究小組利用非聚焦的單陣元超聲換能器對(duì)小鼠大腦進(jìn)行光聲斷層成像，實(shí)現(xiàn)了對(duì)老鼠大腦皮層的高對(duì)比度成像，對(duì)大鼠腦部進(jìn)行光聲斷層成像，血管成像結(jié)果與腦部解剖結(jié)果十分吻合。隨后各式各樣的單探頭掃描實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)用于小鼠的腫瘤生長(zhǎng)、血管變化和關(guān)節(jié)成像。使用單陣元非聚焦超聲換能器采集光聲信號(hào)，對(duì)于每次采集到的距離換能器不同半徑弧的光聲信號(hào)光聲信號(hào)，需對(duì)其求積分。因此不能采集單一方向的光聲信號(hào)，需要圍繞生物組織旋轉(zhuǎn)換能器，采集樣品各個(gè)方向的光聲信號(hào)，最終通過(guò)數(shù)值計(jì)算模擬出光聲圖像。該實(shí)驗(yàn)裝置由于只需一個(gè)超聲換能器，信號(hào)采集電路比較簡(jiǎn)單，成本較低。但由于加入了旋轉(zhuǎn)機(jī)構(gòu)旋轉(zhuǎn)超聲換能器，實(shí)驗(yàn)裝置的結(jié)構(gòu)變得相對(duì)復(fù)雜，采集數(shù)據(jù)時(shí)間稍長(zhǎng)，而且引入了機(jī)械振動(dòng)誤差，成像結(jié)果受機(jī)械硬件影響較大。于是發(fā)展出陣列圓形掃描系統(tǒng)，采用這種方式的系統(tǒng)采集多個(gè)通道的光聲數(shù)據(jù)?？梢杂行У販p少信號(hào)采集時(shí)間，因此這種采集方式被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)者采用。LihongV•Wang等首次用512個(gè)陣列的環(huán)形探頭實(shí)現(xiàn)了高分辨率的大腦血管實(shí)時(shí)成像，并對(duì)小鼠腦中的光聲造影劑進(jìn)行了監(jiān)控。V•Ntzi－achristos等也用64個(gè)陣元組成180°圓弧對(duì)小老鼠的腹部、胸部和心臟進(jìn)成像，它的動(dòng)態(tài)圖像幀頻能達(dá)到10Hz。
篇11
結(jié)核性腦膜炎的危險(xiǎn)因素包括年齡，合并艾滋病感染，營(yíng)養(yǎng)不良，兒童近期麻疹感染，酗酒，惡性腫瘤，成人免疫抑制藥物的使用以及社區(qū)疾病的流行。兒童患者尤其是＜5歲的幼兒TBM的發(fā)病率顯著增高。結(jié)核性腦膜炎的致病菌為結(jié)核分枝桿菌。結(jié)核分支桿菌是一種革蘭氏陽(yáng)性、需要、有芽孢的、無(wú)運(yùn)動(dòng)能力的放線菌目。它具有抗酸性，最常見(jiàn)的抗酸染色法為Ziehl-Neelsen染色法。改良羅氏培養(yǎng)基為培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌最常見(jiàn)及最廣泛使用的培養(yǎng)基。TBM主要發(fā)生在免疫力低下的患者中，合并HIV感染、酗酒、營(yíng)養(yǎng)不良等患者中TBM的比例明顯增高。結(jié)核分枝桿菌主要通過(guò)飛沫傳播。結(jié)核分枝桿菌主要在肺泡巨噬細(xì)胞中繁殖。細(xì)菌通過(guò)血液循環(huán)，在2-4周內(nèi)播散到肺外組織以及腦膜、腦實(shí)質(zhì)相鄰部位產(chǎn)生結(jié)核性肉芽腫。這些病灶通常存在于腦膜和大腦表面的軟腦膜或室管膜下。肉芽腫內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌可處于休眠狀態(tài)數(shù)年。當(dāng)干酪樣肉芽腫內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌進(jìn)入到蛛網(wǎng)膜下腔時(shí)可發(fā)展為結(jié)核性腦膜炎。
3發(fā)病機(jī)理
3.1病原體因素
目前全球主要發(fā)現(xiàn)有四個(gè)基因譜：印度洋、東亞、東非/印度、歐美[7]。不同基因型的結(jié)核分枝桿菌的菌株致病性不同。例如，北京株的結(jié)核分枝桿菌與TBM的發(fā)病關(guān)系密切，歐美菌株主要引起肺結(jié)核[8]。此外，這兩種不同基因型的結(jié)核分枝桿菌侵犯在宿主時(shí)中臨床表現(xiàn)不同。例如，由東亞/北京基因型的菌株引起的腦膜炎的病程相對(duì)較短，并且表現(xiàn)為腦脊液中的白細(xì)胞數(shù)降低，這表明不同基因型的結(jié)核桿菌能影響疾病的進(jìn)程以及顱內(nèi)的炎癥反應(yīng)[9]。東亞/北京型菌株與耐藥性結(jié)核以及HIV的高發(fā)病率緊密相關(guān)。泰國(guó)的一項(xiàng)回顧性研究發(fā)現(xiàn)東亞/北京菌株的一些亞型與TBM的CSF白細(xì)胞計(jì)數(shù)以及疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)，但是與死亡率無(wú)明顯相關(guān)性。
3.2宿主因素
結(jié)核分枝桿菌是一種寄住在宿主巨噬細(xì)胞的吞噬小體中的細(xì)胞內(nèi)寄生病原體。受感染的巨噬細(xì)胞凋亡是宿主殺滅結(jié)核分枝桿菌的一個(gè)有效機(jī)制。結(jié)核分枝桿菌已進(jìn)化出多種基因型以對(duì)抗宿主的免疫反應(yīng)，使得它能夠在宿主的巨噬細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)期存活和繁殖。結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁中兩種重要的糖脂:前體脂甘露糖、脂阿拉伯甘露糖脂。脂阿拉伯甘露糖參與抑制了吞噬小體的成熟、細(xì)胞的凋亡、巨噬細(xì)胞的γ干擾素信號(hào)以及樹(shù)突狀細(xì)胞分泌IL-12。有研究表明，致病性的北京菌株可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌大量TNF-α，IL-10，并且下調(diào)Toll樣受體-2、Toll樣受體-4以及MHC-Ⅱ類分子的表達(dá)。宿主基因的異常能增加結(jié)核分枝桿菌的易感性[10、11]。有研究發(fā)現(xiàn)LTAH4基因能夠干擾體內(nèi)TNF水平并且通過(guò)觸發(fā)異常的炎癥反應(yīng)增加TBM的易感性。一些研究人員還發(fā)現(xiàn)了P2X7受體（一種ATP-Ca2+門控通道）基因具有多態(tài)性。通常情況下，P2X7受體的激活可誘導(dǎo)宿主細(xì)胞的凋亡和感染性結(jié)核桿菌的死亡。但是具有多態(tài)性的宿主的巨噬細(xì)胞出現(xiàn)了凋亡障礙以及殺滅結(jié)核分枝桿菌的缺陷。目前發(fā)現(xiàn)Toll樣受體的多樣性與TB的發(fā)病有關(guān)。Toll樣受體有12個(gè)成員，分別能識(shí)別病原體、激活并啟動(dòng)固有免疫、產(chǎn)生細(xì)胞因子，最終促進(jìn)適應(yīng)性免疫應(yīng)答的形成。一項(xiàng)最新的調(diào)查研究顯示，Toll-IL-1受體域的適配蛋白基因的單核苷酸多態(tài)性與TBM的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)緊密相關(guān)。Toll樣受體-2的多態(tài)性已被證明能夠增加宿主患嚴(yán)重形式的結(jié)核如結(jié)核性腦膜炎、粟粒樣肺結(jié)核的易感性[12]。這些基因中的單核苷酸的多態(tài)性被認(rèn)為是影響細(xì)胞因子的水平以及個(gè)體對(duì)結(jié)核的易感性及抵抗性。γ干擾素基因的多態(tài)性也與結(jié)合的易感性相關(guān)。宿主的易感性與多種因素相關(guān)，如患者年齡、致病菌的基因型、病原體的毒性、合并HIV感染以及其他未知的因素。
3.3免疫發(fā)病機(jī)制
TBM的免疫發(fā)病機(jī)制至今仍不十分清楚。結(jié)核分枝桿菌進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，巨噬細(xì)胞立即識(shí)別它們并啟動(dòng)相應(yīng)的固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答。隨后的炎癥反應(yīng)可導(dǎo)致血腦屏障的破壞、腦水腫以及顱內(nèi)壓的增高。小膠質(zhì)細(xì)胞是CNS對(duì)結(jié)核桿菌產(chǎn)生免疫化學(xué)反應(yīng)的主要細(xì)胞。一些研究顯示，小膠質(zhì)細(xì)胞能夠產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，啟動(dòng)或促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的免疫應(yīng)答（通過(guò)促進(jìn)外周組織中的免疫細(xì)胞進(jìn)入腦組織）。血清及腦脊液中TNF-α、γ干擾素升高的水平與結(jié)核性腦膜炎的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。目前有研究證實(shí)合并HIV感染的患者中腦脊液炎癥反應(yīng)可減輕。腦脊液中的γ干擾素水平的降低與死亡獨(dú)立相關(guān)，這表明γ干擾素能夠提高宿主的免疫及生存[13]。
4病理學(xué)特征
空氣中飛沫中的結(jié)核分支桿菌進(jìn)入人體后觸發(fā)肺泡巨噬細(xì)胞的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。菌血癥初期，結(jié)核分枝桿菌可血行傳播至身體各個(gè)部位，包括腦膜。TBM容易侵犯大腦基底部，引起腦膜應(yīng)對(duì)結(jié)核分枝桿菌抗原的強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)。TBM特征性的病理學(xué)特點(diǎn)是腦膜的炎性反應(yīng)、纖維蛋白性滲出、結(jié)核性血管炎以及腦脊液流出通路受阻導(dǎo)致腦積水。結(jié)核性滲出物經(jīng)在腦組織表面會(huì)產(chǎn)生不同程度的腦水腫、血管周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、反應(yīng)性的小膠質(zhì)細(xì)胞增生，這些反應(yīng)被統(tǒng)稱為“邊緣性腦炎”。TBM顯微鏡下的病理學(xué)特征為上皮細(xì)胞肉芽腫形成、朗格漢斯細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)以及干酪樣壞死。70%的患者有不同程度的血管炎和腦梗死，而大腦中動(dòng)脈等的大面積腦梗塞僅見(jiàn)于3.2%的患者。滲透、增殖性和壞死性血管炎是導(dǎo)致血栓形成的血管病理基礎(chǔ)。腦血管的變化特征為炎性反應(yīng)、血管痙攣、收縮，最終導(dǎo)致腦血栓形成。通過(guò)炎性滲出物的腦膜靜脈也表現(xiàn)出了不同程度的靜脈炎?；壮睾褪夜苣さ臐B出物粘連，室間孔、中腦導(dǎo)水管和第Ⅳ腦室正中孔或側(cè)裂孔狹窄閉塞，腦脊液循環(huán)受阻，導(dǎo)致不同程度的梗阻性腦積水。
5臨床表現(xiàn)
醫(yī)學(xué)研究委員會(huì)量表用來(lái)評(píng)估TBM的嚴(yán)重程度。根據(jù)這個(gè)量表，TBM患者病程可分為三期:Ⅰ期的病人意識(shí)完全清醒并且無(wú)局灶性的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀；Ⅱ期患者可有感覺(jué)異常和局灶性神經(jīng)功能缺損癥狀如輕偏癱和顱神經(jīng)麻痹；Ⅲ期病人可有昏迷和嚴(yán)重的神經(jīng)功能損害如多顱神經(jīng)損害、嚴(yán)重的偏癱或截癱。大多數(shù)結(jié)核性腦膜炎患者在發(fā)展為腦膜刺激癥狀之前2-8周有前驅(qū)不明原因的感染等疾病病史。常見(jiàn)的非特異性癥狀包括:疲倦、納差、乏力、體重減輕、發(fā)熱、頭痛及肌肉酸痛。疾病發(fā)展到一定階段患者可出現(xiàn)顱神經(jīng)損害、視力下降、局灶性神經(jīng)功能缺損、頸項(xiàng)強(qiáng)直、顱內(nèi)壓增高等癥狀。老年患者常缺乏非典型臨床癥狀延誤診斷。老年人結(jié)核性腦膜炎患者可出現(xiàn)亞急性癡呆如記憶障礙和人格改變的典型額葉樣病變。小兒患者常表現(xiàn)為精神行為異常。HIV陽(yáng)性患者癲癇的發(fā)病率明顯增高。癲癇約發(fā)生在50%的小兒患者以及5%的成人TBM患者。癲癇患者的預(yù)后較差。低鈉血癥是TBM患者中常見(jiàn)的代謝異常，與預(yù)后不良相關(guān)。反復(fù)嘔吐、ADH分泌異常以及腦性耗鹽綜合征是低鈉血癥的常見(jiàn)原因。低鈉血癥可加重腦水腫，因此需要緊急處理。ADH分泌異常型高鈉血癥多由于下丘腦功能障礙分泌過(guò)多的ADH導(dǎo)致鈉水儲(chǔ)留，低鈉血癥多為正常容量型或高容量型。腦性耗鹽綜合征目前認(rèn)為是由于抗利鈉肽水平升高導(dǎo)致尿鈉丟失過(guò)多，并伴隨水分的丟失。臨床補(bǔ)鈉不可過(guò)快，防止發(fā)生腦橋中央髓鞘溶解綜合征。顱內(nèi)壓增高是TBM患者最常見(jiàn)的癥狀，并且與死亡率和致殘率相關(guān)。顱內(nèi)壓增高最常見(jiàn)的原因是腦積水，其次是腦水腫。顱內(nèi)壓增重者可發(fā)生腦疝形成。CT/MRI檢查可發(fā)現(xiàn)腦室擴(kuò)大和腦積水。顱內(nèi)壓增高及腦積水往往提示預(yù)后不良。約有20%-30%的患者會(huì)出現(xiàn)顱神經(jīng)的損害。第Ⅵ顱神經(jīng)損害較常見(jiàn)，第Ⅲ、第Ⅳ顱神經(jīng)較少受累。顱神經(jīng)受影響主要是因?yàn)榛撞康臐B出物包繞神經(jīng)干或者顱內(nèi)壓增高所致。視力減退也是TBM一種常見(jiàn)并發(fā)癥。視神經(jīng)損害可能的原因?yàn)椋阂暯徊嫘灾刖W(wǎng)膜炎、大量腦積水導(dǎo)致第三腦室受壓壓迫視神經(jīng)、視神經(jīng)肉芽腫或乙胺丁醇的毒副作用。約有70%的TBM患者發(fā)生腦梗塞。梗塞的部位多位于內(nèi)囊、基底節(jié)、丘腦等部位。梗塞多發(fā)生于內(nèi)側(cè)丘紋動(dòng)脈及丘腦穿通動(dòng)脈供血區(qū)。大腦后動(dòng)脈及其分支的供血區(qū)很少受累。梗死可無(wú)癥狀，也可以導(dǎo)致嚴(yán)重殘疾或死亡，并且與預(yù)后不良相關(guān)[14]。兒童患者中基底節(jié)和內(nèi)囊梗死的預(yù)后較差。單純半球的梗塞預(yù)后良好。有證據(jù)表明，疾病早期發(fā)生的梗塞多由于血管痙攣所致，后期主要原因是血管內(nèi)膜增生[15]?？菇Y(jié)核治療不能降低腦梗塞的發(fā)病率。
6診斷與鑒別診斷
TBM的早期診斷是改善臨床預(yù)后的基礎(chǔ)。僅根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)難以確診或排除TBM，往往確診時(shí)已經(jīng)發(fā)生了腦損傷。目前TBM的診斷仍缺乏一個(gè)快速、靈敏的方法。
6.1腦脊液檢查
腦脊液檢查是TBM確診的重要檢查方法。特征性的腦脊液改變有助于鑒別其他類型的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染。典型腦脊液改變?yōu)榧?xì)胞數(shù)增多，以單核為主，蛋白增高，糖及氯化物降低。HIV感染患者CSF中細(xì)胞數(shù)可為0。診斷的金標(biāo)準(zhǔn)為腦脊液中找到結(jié)核分支桿菌。TBM患者腦脊液抗酸桿菌涂片的陽(yáng)性率僅有5-30%。腦脊液培養(yǎng)陽(yáng)性的臨床診斷率為25%-70%，但是耗時(shí)長(zhǎng)。HIV相關(guān)的結(jié)核性腦膜炎細(xì)菌涂片和腦脊液培養(yǎng)的陽(yáng)性率分別為69%和87.9%。增加腦脊液樣本量以及延長(zhǎng)涂片檢查時(shí)間（至少30min）及反復(fù)檢查可提高涂片的陽(yáng)性率[16]。腦脊液的標(biāo)本量、癥狀持續(xù)時(shí)間、腦脊液中中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、乳酸水平、糖量均與診斷有關(guān)。ADA在全身組織中均有分布，在淋巴組織尤其是活動(dòng)性T淋巴細(xì)胞中水平增高，被認(rèn)為是細(xì)胞免疫的標(biāo)志物。近期一項(xiàng)Meta分析顯示ADA診斷的靈敏度和特異性分別為79%和91%[17]。但是目前認(rèn)為診斷TBM缺乏特異性，不推薦作為TBM的常規(guī)診斷方法[18]，ADA水平升高只能進(jìn)一步幫助確診TBM。聚合酶鏈反應(yīng)是檢測(cè)腦脊液中結(jié)核分枝桿菌的DNA的一種常用方法。腦脊液細(xì)菌培養(yǎng)的靈敏度和特異性分別為39%和100%，而是用PCR技術(shù)檢測(cè)的靈敏度和特異性為75%和100%。腦脊液TB培養(yǎng)陽(yáng)性的患者靈敏度顯著提高。選擇合適的結(jié)核分枝桿菌特異性的DNA以及防止腦脊液標(biāo)本污染是獲得高特異性的關(guān)鍵。腦脊液中找到結(jié)核分枝桿菌仍然是診斷的一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)。一些新型的診斷方法如顯微藥物敏感性實(shí)驗(yàn)（MODS）、ELISA法檢測(cè)脂阿拉伯甘露糖抗原正在研究中。
6.2影像學(xué)診斷
CT和MRI是TBM的診斷和并發(fā)癥的評(píng)估常用的影像學(xué)檢查方法。腦積水、結(jié)核瘤以及腦膜強(qiáng)化是TBM常見(jiàn)的影像學(xué)特征[19]。TBM的CT特點(diǎn)包括基底池的強(qiáng)化、滲出物，腦積水以及腦室周圍梗死灶。腦積水及基底池強(qiáng)化是最常見(jiàn)的異常表現(xiàn)。平掃CT上基底池高密度影被認(rèn)為是敏感性和特異性的表現(xiàn)。脈絡(luò)膜從強(qiáng)化以及腦室擴(kuò)大應(yīng)高度懷疑TBM。常見(jiàn)的異常表現(xiàn)包括：腦積水，腦膜及基底池強(qiáng)化，腦梗死和局灶性/彌漫性腦水腫，結(jié)核瘤。TBM患者腦積水與腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)及預(yù)后不良存在相關(guān)性[20]。MRI比CT檢查敏感性更高。MRI增強(qiáng)檢查可在疾病早期發(fā)現(xiàn)腦膜的強(qiáng)化，有報(bào)道稱高達(dá)39%的TBM患者早期MRI可出現(xiàn)異常表現(xiàn)。在MRI成像中，局部的腦膜強(qiáng)化比彌漫性腦膜強(qiáng)化更常見(jiàn)。此外，胸片或胸部CT發(fā)現(xiàn)活動(dòng)性肺結(jié)核尤其是粟粒性肺結(jié)核應(yīng)高度懷疑TBM。
6.3鑒別診斷
各種類型的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、血管疾病、炎癥性疾病、腫瘤都需與TBM相鑒別。有時(shí)難以同部分細(xì)菌性腦膜炎鑒別。TBM有六大特征：病程超過(guò)5天，頭痛，腦脊液細(xì)胞數(shù)＜1000×106/L，顏色淡黃或微混，淋巴細(xì)胞比例＞30%，蛋白含量增高＞1g/L[21]。一些炎癥性或自身免疫性疾?。ㄈ鏦egener肉芽腫、結(jié)節(jié)?。┏艘鹉X膜的炎癥外，還會(huì)引起其他器官的炎癥。隱球菌性腦膜炎患者中頭痛通常是最主要的有時(shí)甚至是唯一的臨床表現(xiàn)。隱腦患者中腦膜刺激征常不明顯，神經(jīng)影像學(xué)檢查往往也是正常的。腦脊液墨汁染色找到隱球菌可確診。弓形蟲(chóng)感染患者也可以表現(xiàn)為彌漫性的腦膜炎癥。腦脊液中葡萄糖的濃度明顯降低時(shí)，應(yīng)考慮到癌性腦膜炎的可能。約有5%的腫瘤患者出現(xiàn)癌性腦膜炎。原發(fā)性彌漫性腦膜膠質(zhì)瘤是一種罕見(jiàn)情況，即異位細(xì)胞巢的神經(jīng)膠質(zhì)瘤種植在軟腦膜上產(chǎn)生類似于慢性感染性炎癥的表現(xiàn)。
7結(jié)核性腦膜炎和人類免疫缺陷
病毒HIV感染患者TBM的發(fā)病率和死亡率明顯增加。一些研究發(fā)現(xiàn)，HIV感染并不會(huì)改變TBM患者的臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果、影像學(xué)表現(xiàn)以及對(duì)治療的反應(yīng)。HIV陽(yáng)性患者CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯減少。HIV感染會(huì)削弱CSF的炎癥反應(yīng)，大多數(shù)HIV患者腦脊液中可無(wú)炎性改變[22]。然而，另外一些相反的研究表明，HIV-陰性TBM患者與HIV-陽(yáng)性TBM患者臨床表現(xiàn)仍存在不同。例如，有研究指出HIV感染患者中胸片提示活動(dòng)性肺結(jié)核的比例更高，而TBM的經(jīng)典CT成像（梗阻性腦積水和基底池強(qiáng)化）卻不太突出。HIV-陰性患者顱內(nèi)占位性病變更加常見(jiàn)。已有報(bào)道多重耐藥性TBM的感染及腦脊液的非炎癥性改變。早期的研究發(fā)現(xiàn)，HIV感染的TBM患者的嗜中性粒細(xì)胞增多、腦脊液細(xì)菌涂片及培養(yǎng)的陽(yáng)性率高，對(duì)抗結(jié)核藥物的耐藥性高。
8多重耐藥性結(jié)核性腦膜炎
（MDR-TBM）耐藥性TBM已成為一個(gè)日益嚴(yán)重的問(wèn)題，多重耐藥性結(jié)核性腦膜炎的死亡率高達(dá)100%[23]。2007年，全球大約有50萬(wàn)例多重耐藥性結(jié)核病,2008年約有44萬(wàn)MDR-TBM患者，其中印度和中國(guó)患者約占一半比例。在結(jié)核高發(fā)病率國(guó)家中，MDR-TBM所占比例約為1%-14%甚至更高。HIV患者中結(jié)核菌的耐藥性更常見(jiàn)。單純異煙肼耐藥或合并鏈霉素耐藥對(duì)患者的生存率無(wú)明顯影響，但是合并HIV感染的患者死亡率明顯升高。
9臨床治療及預(yù)后
TBM患者應(yīng)早期開(kāi)始抗結(jié)核治療?？菇Y(jié)核治療往往需要在找到結(jié)核桿菌之前的經(jīng)驗(yàn)治療。常用的一線抗結(jié)核藥物有異煙肼、利福平、吡嗪酰胺、鏈霉素、乙胺丁醇。二線抗結(jié)核藥物有乙硫異煙肼、環(huán)絲氨酸、對(duì)氨基水楊酸、卷曲霉素等。喹諾酮類藥物主要用于耐藥性結(jié)核的抗菌治療。大多數(shù)一線抗結(jié)核藥物（乙胺丁醇除外）都能很好的通過(guò)血腦屏障。
9.1抗結(jié)核藥物治療方案目前，對(duì)TBM的抗結(jié)核治療仍沒(méi)有一個(gè)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。世界衛(wèi)生組織推薦以抗結(jié)核為基礎(chǔ)的治療。目前對(duì)TBM患者推薦至少3個(gè)月的強(qiáng)化治療和至少6個(gè)月的鞏固治療。強(qiáng)化治療方案包括四種一線抗結(jié)核藥物：異煙肼、利福平膠囊、吡嗪酰胺和鏈霉素。TBM患者中抗結(jié)核治療的鞏固階段通常延續(xù)7-10個(gè)月。美國(guó)胸科協(xié)會(huì)指南推薦TBM較長(zhǎng)時(shí)間（9-12個(gè)月）的抗結(jié)核治療。HIV陽(yáng)性患者的抗結(jié)核治療與HIV陰性患者治療相同。當(dāng)患者對(duì)合適的抗結(jié)核藥物的反應(yīng)不佳或既往有耐藥性肺結(jié)核病史時(shí)應(yīng)考慮到多重耐藥性結(jié)核性腦膜炎的可能。有效的指南推薦抗結(jié)核方案至少包括五種藥物。治療方案應(yīng)包括鞘內(nèi)注射抗結(jié)核藥物。在這五種藥物中，必須包含喹諾酮類。治療包括初始的6個(gè)月強(qiáng)化治療以及后期12-18個(gè)月的鞏固治療。隨著廣泛耐藥性結(jié)核病的出現(xiàn)（一種耐多藥結(jié)核病至少對(duì)異煙肼和利福平，所有氟喹諾酮類，和至少一個(gè)的可注射的藥物，如丁胺卡那霉素，卡那霉素，卷曲霉素等產(chǎn)生耐藥），對(duì)TBM的治療提出巨大的挑戰(zhàn)。免疫重建炎癥綜合征在合并HIV感染的結(jié)核患者中也存在致命性的危險(xiǎn)。這一并發(fā)癥可能在使用抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療初期或治療后3個(gè)月后出現(xiàn)。免疫重建炎癥綜合征的特點(diǎn)是CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)的減少。同時(shí)服用抗結(jié)核藥物和抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物可能會(huì)產(chǎn)生明顯的藥物的相互作用。例如，有利福平誘導(dǎo)的細(xì)胞色素P-450、P-糖蛋白導(dǎo)致非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，尤其是蛋白酶抑制劑的濃度降低。這一效應(yīng)潛在性削弱了抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物的療效。
9.2類固醇激素激素可以明顯降低TBM的死亡率以及減輕存活者的神經(jīng)功能缺損。有研究證明使用地塞米松可改善TBM的預(yù)后，這可能是因?yàn)榈厝姿赡軠p輕腦水腫以及腦梗死的發(fā)生率。皮質(zhì)類固醇激素在TBM患者中的具體作用機(jī)制仍不明確。目前認(rèn)為TBM患者的高死亡率和致殘率與顱內(nèi)的炎癥反應(yīng)嚴(yán)重性有關(guān)。皮質(zhì)類固醇激素可能由于減輕腦實(shí)質(zhì)和腦膜的炎癥反應(yīng)、腦水腫以及顱內(nèi)壓增高。皮質(zhì)類固醇激素被認(rèn)為可以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子和趨化因子。Simmons和他的同事證明，皮質(zhì)類固醇激素治療改善預(yù)后并不是因?yàn)榻閷?dǎo)腦脊液中免疫炎癥介質(zhì)的改變或者通過(guò)抑制外周T細(xì)胞對(duì)對(duì)結(jié)核分枝桿菌的免疫應(yīng)答[24]?；|(zhì)金屬蛋白酶為細(xì)胞外基質(zhì)降解的介質(zhì)并且與CNS的一些炎癥反應(yīng)的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。最新一項(xiàng)研究證實(shí)，地塞米松能夠在治療早期降低腦脊液中金屬蛋白酶-9的濃度。作者認(rèn)為，這可能是皮質(zhì)類固醇激素能夠改善TBM預(yù)后的機(jī)制之一[25]。
9.3預(yù)后TBM的早期診斷和治療是提高預(yù)后的關(guān)鍵。然而，抗結(jié)核治療只能使不到50%的患者免于死亡和殘疾。成人皮質(zhì)類固醇激素的使用與死亡率的下降明顯相關(guān)。在疾病早期階段開(kāi)始使用激素可明顯降低死亡率和致殘率。一些研究認(rèn)為腦脊液中細(xì)胞比例，尤其是白細(xì)胞計(jì)數(shù)減低與死亡率呈正相關(guān)。存活患者與腦脊液中淋巴細(xì)胞比例減少及中性粒細(xì)胞比例升高，這提示中性粒細(xì)胞的比例有保護(hù)作用。患者年齡＜5歲，＞50歲以及病程超過(guò)2個(gè)月的患者死亡率最高。兒科的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，治療后只有20%患者能夠完全恢復(fù)，80%的患者死亡或者殘疾。在大多數(shù)研究中，疾病的分期是與死亡率相關(guān)的一個(gè)關(guān)鍵因素。一些研究指出，五大因素與預(yù)后相關(guān)：疾病的Ⅲ期階段，低血糖水平，CSF/外周血血糖比，CSF蛋白水平，以及影像學(xué)檢查異常。在對(duì)TBM患者預(yù)后的多因素logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，種族、疾病的分期、抽搐、運(yùn)動(dòng)功能、腦干功能障礙以及腦梗死為TBM預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[26]。合并HIV感染的TBM患者死亡率更高。在一項(xiàng)比較研究中，HIV感染患者死亡率為63.3%、而HIV陰性患者死亡率僅為17.5%。
篇12
1.2教育特點(diǎn)
高等職業(yè)教育中，衛(wèi)生職業(yè)院校的培養(yǎng)目標(biāo)是主要是使求學(xué)者獲得衛(wèi)生職業(yè)或職業(yè)群所需的實(shí)際能力(包括技能和知識(shí)等)，提供通向醫(yī)療衛(wèi)生職業(yè)的道路。因此培養(yǎng)學(xué)生的實(shí)踐技能操作時(shí)培養(yǎng)的重點(diǎn)方向。實(shí)踐技能不僅包括醫(yī)學(xué)相關(guān)的實(shí)踐技能，還包括對(duì)計(jì)算機(jī)技術(shù)的使用和醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)技術(shù)的熟練使用。而當(dāng)下大部分衛(wèi)生類院校沒(méi)有開(kāi)設(shè)專門的醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)相關(guān)課程，學(xué)生在進(jìn)入工作崗位前需要單獨(dú)進(jìn)行相關(guān)的崗前醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)技能的培訓(xùn)，才能進(jìn)入工作崗位。由此可見(jiàn)在醫(yī)學(xué)院校和衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院開(kāi)設(shè)醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)技術(shù)課程已經(jīng)迫在眉睫。
1.3計(jì)算機(jī)教學(xué)
衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院的計(jì)算機(jī)教學(xué)現(xiàn)今仍以計(jì)算機(jī)基礎(chǔ)知識(shí)為主要教學(xué)內(nèi)容，一般學(xué)時(shí)為54學(xué)時(shí)，主要講授計(jì)算機(jī)基礎(chǔ)知識(shí)、網(wǎng)絡(luò)基礎(chǔ)知識(shí)、Office辦公自動(dòng)化等方面內(nèi)容。在實(shí)際的教學(xué)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)許多學(xué)生在中學(xué)時(shí)代的計(jì)算機(jī)課程中已經(jīng)學(xué)會(huì)了上述大部分知識(shí)，教學(xué)存在重復(fù)性，同時(shí)也無(wú)法突出衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院的特點(diǎn)，和醫(yī)學(xué)專業(yè)的特點(diǎn)。不能實(shí)現(xiàn)與醫(yī)療衛(wèi)生服務(wù)機(jī)構(gòu)的崗位需求無(wú)縫對(duì)接。因此在衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院等衛(wèi)生類院校開(kāi)設(shè)醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)課程，已經(jīng)成為了目前迫切需要解決的問(wèn)題
2醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)和醫(yī)學(xué)信息系統(tǒng)
2.1醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)
醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)是一門以醫(yī)學(xué)信息為主要探究對(duì)象，以醫(yī)學(xué)信息的運(yùn)動(dòng)規(guī)律及應(yīng)用方法為主要探究?jī)?nèi)容，以現(xiàn)代計(jì)算機(jī)為主要工具，以解決醫(yī)藥工作者在處理醫(yī)學(xué)信息過(guò)程中的各種問(wèn)題為主要探究目標(biāo)的一門新興學(xué)科，是一門介于醫(yī)學(xué)、計(jì)算機(jī)科學(xué)與信息學(xué)之間的交叉學(xué)科，應(yīng)用性強(qiáng)有不乏自身基礎(chǔ)理論的探究。
2.2醫(yī)學(xué)信息系統(tǒng)醫(yī)學(xué)信息系統(tǒng)
涵蓋整個(gè)與醫(yī)療、衛(wèi)生有關(guān)的信息加工、傳遞、存儲(chǔ)以及利用等相關(guān)的信息系統(tǒng)，包括公共衛(wèi)生信息系統(tǒng)、醫(yī)療服務(wù)信息系統(tǒng)（主要由醫(yī)院信息系統(tǒng)組成），衛(wèi)生行政管理信息系統(tǒng)所組成。
3教學(xué)計(jì)劃和實(shí)施方案
3.1教材選擇
醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)作為一門新興學(xué)科，目前可供選擇的教材較少，推薦使用以下教材：（1）《醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)》，高等教育出版社。該教材也是全國(guó)醫(yī)學(xué)信息技術(shù)人才培養(yǎng)工程教材、全國(guó)醫(yī)學(xué)信息技術(shù)考試管理中心崗位技能考試的制定教材。（2）《衛(wèi)生信息學(xué)》，衛(wèi)生出版社。
3.2教師培訓(xùn)
原有的衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院的計(jì)算機(jī)課教師和實(shí)驗(yàn)教師可以參加全國(guó)醫(yī)學(xué)信息技術(shù)考試管理中心的培訓(xùn)，考試后獲得相關(guān)的從業(yè)資格。同時(shí)鼓勵(lì)教師到醫(yī)院等醫(yī)療衛(wèi)生服務(wù)機(jī)構(gòu)進(jìn)修，參觀、學(xué)習(xí)，了解醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用，更好地實(shí)現(xiàn)教學(xué)目標(biāo)。3.3教學(xué)計(jì)劃在第一學(xué)年即可開(kāi)設(shè)，建議設(shè)54學(xué)時(shí)，其中理論12學(xué)時(shí)，實(shí)踐42學(xué)時(shí)。同時(shí)針對(duì)不同專業(yè)制定不同的教學(xué)計(jì)劃。
3.4教學(xué)目標(biāo)及其具體實(shí)施方案
衛(wèi)生職業(yè)院校開(kāi)設(shè)的專業(yè)較多，以我院為例，開(kāi)設(shè)了護(hù)理、口腔醫(yī)學(xué)技術(shù)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)、藥學(xué)、康復(fù)治療技術(shù)、醫(yī)學(xué)營(yíng)養(yǎng)、公共衛(wèi)生管理等專業(yè)。不同的專業(yè)學(xué)生學(xué)習(xí)的專業(yè)課程完全不同，日常使用和管理的醫(yī)學(xué)信息也不盡相同，可以針對(duì)專業(yè)開(kāi)設(shè)不同的課程。如護(hù)理專業(yè)學(xué)生重點(diǎn)介紹門診護(hù)士和住院護(hù)士的醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)技術(shù)的使用。藥學(xué)專業(yè)學(xué)生重點(diǎn)學(xué)習(xí)藥房（藥局）的計(jì)算機(jī)管理系統(tǒng)。檢驗(yàn)專業(yè)重點(diǎn)學(xué)習(xí)醫(yī)學(xué)、衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢疫實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)學(xué)信息的管理。根據(jù)不同的專業(yè)突出不同的側(cè)重點(diǎn)，在教學(xué)中可以分專業(yè)教學(xué)，從而達(dá)到醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)技術(shù)的學(xué)習(xí)目的。下面以護(hù)理專業(yè)學(xué)生為例介紹教學(xué)目標(biāo)及其具體實(shí)施方案。護(hù)理專業(yè)學(xué)生可根據(jù)學(xué)習(xí)方向重點(diǎn)學(xué)習(xí)醫(yī)院信息系統(tǒng)的門診護(hù)理工作站、住院護(hù)理中心和社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)機(jī)構(gòu)等衛(wèi)生服務(wù)機(jī)構(gòu)的醫(yī)學(xué)信息管理系統(tǒng)軟件的使用。以住院護(hù)理中心的計(jì)算機(jī)管理中，住院護(hù)士應(yīng)具備以下醫(yī)院信息系統(tǒng)的計(jì)算機(jī)操作能力，如表1，表2所示。
3.5改變教學(xué)實(shí)施策略，改革教學(xué)方式
結(jié)合醫(yī)學(xué)信息管理系統(tǒng)軟件的操作采用以實(shí)訓(xùn)教學(xué)為主的教學(xué)、考核方式。改革考試方式，采用實(shí)踐技能操作的考試方法，模擬醫(yī)院的科室設(shè)置，安裝醫(yī)院信息計(jì)算機(jī)管理系統(tǒng)，同時(shí)設(shè)置掛號(hào)室、收款室、醫(yī)生診室、藥局、門診處置室等部門，由不同專業(yè)學(xué)生扮演患者、掛號(hào)護(hù)士、收款人員、門診醫(yī)生、藥局藥劑師、門診護(hù)士，分組進(jìn)行操作，完成整個(gè)門診操作流程。同時(shí)鼓勵(lì)參加全國(guó)醫(yī)學(xué)信息計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)認(rèn)證考試。使學(xué)生畢業(yè)時(shí)獲得雙證。
篇13
眾所周知，二十世紀(jì)醫(yī)學(xué)成像有了巨大的突破和近戰(zhàn)，現(xiàn)如今，隨著各種醫(yī)學(xué)成像系統(tǒng)和設(shè)備的出現(xiàn)，這些裝置都成了現(xiàn)代醫(yī)生進(jìn)行臨床診斷的重要依據(jù)所在。相關(guān)資料顯示，很多知名企業(yè)像是西門子、飛利浦、GE等大型企業(yè)都開(kāi)始設(shè)立了專門的醫(yī)學(xué)成像設(shè)備研發(fā)部門，再加上醫(yī)療機(jī)構(gòu)的需求，這直接導(dǎo)致了醫(yī)學(xué)影像專業(yè)人才巨大的高端人才缺口所在。筆者要著重指出的現(xiàn)代設(shè)備需求的都是應(yīng)用型的復(fù)合人才需要有極強(qiáng)的動(dòng)手和解決實(shí)際問(wèn)題的基本能力，從這一點(diǎn)我們不難看出，當(dāng)前社會(huì)人才需求的類型和具體要求所在。
三、現(xiàn)階段現(xiàn)代醫(yī)學(xué)成像技術(shù)課程教學(xué)中的問(wèn)題所在
第一，教學(xué)內(nèi)容理論性較強(qiáng)，內(nèi)容較多，課時(shí)量相對(duì)較少因而對(duì)于某些成像技術(shù)和一些基本算法實(shí)現(xiàn)的過(guò)程講解不深入，甚至一略而過(guò)，致使學(xué)生學(xué)完該課程后對(duì)于醫(yī)學(xué)成像技術(shù)這門課的認(rèn)識(shí)和理解仍然停留在比較膚淺的階段，很難有效地實(shí)現(xiàn)既定的培養(yǎng)目標(biāo)。第二，教學(xué)方法不夠豐富目前課堂多采用現(xiàn)代的多媒體教學(xué)，但是又過(guò)分依賴于多媒體，而單純的多媒體教學(xué)又會(huì)使學(xué)生產(chǎn)生偷懶情緒，一晃而過(guò)的幻燈片并不會(huì)給學(xué)生留下深刻的印象，這很大程度上影響了學(xué)生學(xué)習(xí)的興趣和教學(xué)的效果。第三，現(xiàn)有的考核體系不夠完善醫(yī)學(xué)成像技術(shù)具有醫(yī)理工三結(jié)合的特點(diǎn)，融合了當(dāng)今諸多高新技術(shù)，不僅注重基本成像原理的基礎(chǔ)理論知識(shí)，更注重對(duì)儀器設(shè)備的實(shí)際動(dòng)手操作。傳統(tǒng)教學(xué)體系，已然不適用于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)教學(xué)了。
四、新時(shí)期現(xiàn)代醫(yī)學(xué)成像技術(shù)課程教學(xué)改革策略分析
（一）關(guān)于教學(xué)內(nèi)容的改革
筆者認(rèn)為要針對(duì)當(dāng)前社會(huì)需求在具體選擇合適教材，主要教材是《醫(yī)學(xué)成像系統(tǒng)》，輔教材可以選擇《醫(yī)學(xué)影像成像理論》和《醫(yī)學(xué)成像技術(shù)》。同時(shí)，筆者將為學(xué)生準(zhǔn)備自編的講義和其他輔助參考資料。在實(shí)際教學(xué)過(guò)程中，利用一切可利用的多媒體教學(xué)手段和現(xiàn)代化教學(xué)方法來(lái)綜合利用其次，借助現(xiàn)代教育技術(shù)，結(jié)合多媒體手段來(lái)豐富課堂教學(xué)的內(nèi)容。
（二）關(guān)于實(shí)踐教學(xué)的改革與創(chuàng)新
現(xiàn)代教學(xué)中實(shí)踐性教學(xué)，是為了更好的將復(fù)雜的額理論榮辱到實(shí)際動(dòng)手當(dāng)中，主要體現(xiàn)的實(shí)踐性的基本特點(diǎn)。高校應(yīng)當(dāng)開(kāi)設(shè)必要的相關(guān)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，為學(xué)生創(chuàng)造更多的實(shí)際動(dòng)手機(jī)會(huì)和實(shí)踐能力的培養(yǎng)，這樣以來(lái)，學(xué)生在實(shí)際操作過(guò)程中就會(huì)真正了解到自己的缺點(diǎn)并努力進(jìn)行系統(tǒng)性的改進(jìn)。
（三）考核體系的改變
傳統(tǒng)的教學(xué)考評(píng)體系中，仍采取的是筆試考試為主，實(shí)踐考試為輔。然而，這種模式并不能真實(shí)檢驗(yàn)學(xué)生對(duì)知識(shí)掌握的具體情況和實(shí)際操作能力。筆者在實(shí)際考核過(guò)程中會(huì)逐步加強(qiáng)實(shí)踐環(huán)節(jié)的考試并將這些成績(jī)?nèi)谌氲狡谀┛荚嚳傇u(píng)成績(jī)當(dāng)中。
